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作者：蒋静;林颖峥;蔡一村;冯之航;王艳;郁蕾;熊炜;李树清;李健;薛俊欣;张强;
单位：上海海关动植物与食品检验检疫技术中心;
摘要：CRISPR/Cas核酸检测技术是新一代生物病原体核酸检测技术，具有灵敏度高、特异性强、准确快速的优点，结合RAA等温扩增技术，可以放大检测的灵敏度。本研究通过对FMDV全基因全序列比对，针对7个不同血清型FMDV设计两套引物和相应crRNA。样品核酸经RAA扩增后，加入CRISPR/Cas13a体系进行反应，检测荧光信号，建立了口蹄疫病毒RAA-CRISPR/Cas13a新型分子生物学检测方法，并对其灵敏性、特异性和一致性进行了检测。研究结果显示，本研究建立的方法对RAA检测有放大作用，方法灵敏度达到10~2拷贝/μL，且特异性强。对临床样本开展检测，结果与标准荧光RT-PCR检测结果几乎完全一致。本研究建立的RAA-CRISPR/Cas13a方法可以特异性检测口蹄疫7个血清型毒株，方法灵敏度较高、重复性好，可以丰富FMDV的现有检测手段。
关键词：口蹄疫病毒;;快速检测;;RAA;;Cas13a
基金资助：上海市科技创新行动计划项目(22140900500);; 国家重点研发计划(2022YFD1800705);; “上海市科技创新行动计划”农业领域项目(22N31900200)
