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作者：陈可琪;廖芸;蒋国润;赵恒;于丽;孔美军;王晶晶;李丹丹;赵鑫;刘龙丁;郑惠文;
单位：中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所;中国医学科学院病毒疫苗研发系统创新研究重点实验室;
摘要：本研究使用EV-A71灭活疫苗或CV-A16灭活疫苗免疫BALB/c小鼠，每种疫苗通过肌肉注射和皮内注射的方式分别两针免疫小鼠后14d，检测动物体内的中和抗体和细胞免疫应答水平。随后我们筛选CD19~+EV-A71~+B细胞或CD19~+CV-A16~+B细胞，对分选获得的特异性B细胞的BCR抗体重链基因进行巢式PCR扩增。随后对获取的抗体基因打靶，获得重链IGHV、IGHD、IGHJ基因的胚系来源，并对抗体IGH基因分类，对可变区CDR3区域氨基酸长度进行分析。结果表明，EV-A71实验性疫苗和CV-A16实验性疫苗两次免疫后，均能诱导较好的中和抗体水平，但是皮内免疫效果优于肌肉注射效果。EV-A71实验性疫苗或CV-A16实验性疫苗皮内注射小鼠与肌肉注射小鼠相比，IGHV基因谱系更加丰富。其中EV-A71疫苗通过两种接种方式产生的共有基因谱系为IGHV1-63*02,CV-A16疫苗通过两种接种方式产生的共有基因谱系为IGHV3-8*02。皮内注射比肌肉注射诱导的抗体重链可变区CDR3结构域的氨基酸长度变化更为明显，特别是CV-A16皮内注射小鼠重链可变区的CDR3区域长度主要集中在13个氨基酸，最长达到17个氨基酸。综上，皮内注射和肌肉注射诱导产生的特异性中和抗体滴度不同，CVA16通过皮内免疫诱导的中和抗体滴度高于肌肉注射诱导的抗体滴度，后续的BCR重链基因进化特征也存在明显的差异，这些发现为后续的联合疫苗设计提供参考。
关键词：EV-A71;CV-A16;肌肉注射;皮内注射;B细胞受体库;重链可变区基因
基金资助：云南省科技计划-基础研究专项（项目号：202401AS070047）,题目：EV-A71和CV-A16抗原预存免疫对CVA10和CV-A6抗原诱导的B细胞和T细胞免疫的影响; 云南省科技计划-生物医药专项（项目号：202402AA310018）,题目：EV71-CA16-CA10-CA6灭活疫苗的制备、评价及多价疫苗关键抗原表位筛选;云南省科技计划-生物医药专项（项目号：202202AA100001）,题目：EV71-CA16联合疫苗临床前研究; 云南省科技人才与平台计划（项目号：202305A
