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作者：霍玉奇;马杰;王超;刘金瑾;
单位：郑州大学附属传染病医院(河南省传染病医院,郑州市第六人民医院);
摘要：探讨基于重组杆状病毒表达系统的不同亚型诺如病毒衣壳蛋白VP1表达及组装情况。将来源于13个（GI.1、GI.2、GI.3、GI.4、GI.5、GI.6、GI.8、GII.1、GII.4、GII.6、GII.9、GII.12和GII.13）不同亚型的诺如病毒VP1蛋白序列根据Sf9昆虫细胞密码子使用频率进行优化，合成并连接到pFastBac-Dual载体的Pph启动子下游制备穿梭质粒，转化DH10Bac E.coli感受态细胞制备杆粒，最后转染Sf9细胞制备重组杆状病毒。利用制备的重组杆状病毒感染Sf9细胞后收获培养液，采用超高速离心和氯化铯密度梯度离心的方法对蛋白进行纯化，SDS-PAGE和Western blot方法对蛋白表达情况进行鉴定，透射电子显微镜分析蛋白组装情况。成功制备表达13个诺如病毒不同亚型VP1蛋白的重组杆状病毒，感染Sf9细胞后经SDS-PAGE和Western blot分析显示，GI.1、GI.2、GI.5、GI.6、GI.8、GII.1、GII.4、GII.6、GII.12和GII.13 VP1蛋白中高度水平表达，GI.3、GI.4、和GII.9 VP1蛋白低水平表达。氯化铯密度梯度离心后，GI.1、GI.5、GI.8、GII.4、GII.6、GII.12和GII.13 VP1蛋白可见明显蛋白富集条带，但GI.2、GI.6和GII.1 VP1蛋白未观察到蛋白富集条带。透射电子显微镜显示GI.1、GI.5、GI.8、GII.4、GII.6、GII.12和GII.13 VP1蛋白成功组装成病毒样颗粒（virus-like particles, VLPs）。透射电子显微镜（Transmission Electron Microscopy, TEM）下GI.2和GI.6沉淀复溶蛋白未观察到或者只观察到少量VLPs，而GII.1 VP1观察到大量VLPs。利用重组杆状病毒表达系统表达诺如病毒VP1蛋白，个别VP1蛋白高水平表达但不能有效组装成VLPs，表明VP1蛋白的有效组装可能有赖于其它因素或者因子的协同作用。
关键词：诺如病毒;衣壳蛋白;重组杆状病毒;病毒样颗粒
基金资助：河南省重点研发和推广专项（科技攻关）（项目号：252102310377）,题目：诺如病毒VP1蛋白N端降解及干预研究
