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作者：林启晗;郑张琦;顾天梦;李川;杜珊珊;朱武洋;王世文;李建东;
单位：传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室,国家卫生健康委员会生物安全重点实验室,医学病毒和病毒病重点实验室,中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所;贵州医科大学公共卫生与健康学院,环境污染与疾病监控教育部重点实验室;
摘要：基孔肯雅病毒（Chikungunya virus, CHIKV）主要经伊蚊叮咬可在人间快速传播，引发大范围规模性疫情，此外，病毒适应性突变可对病毒传播特征造成显著影响。本研究通过分步克隆的方法，以我国本地传播病毒分离株（CHIKV-GD133）基因组为模板，以商业化质粒pSMART为载体骨架，分4步利用TOP10F、和EPI300两种感受态细胞构建了分别在T7和CMV启动子驱动下的CHIKV的全长感染性克隆，分别转染表达有T7聚合酶的BHK细胞系（BHK/T7-9）和Vero细胞后，通过显微镜观察、RT-PCR、IFA和噬斑滴定等方法，检测细胞病变效应、结构蛋白的表达、子代病毒粒子基因组序列、病毒基因组复制水平等，确认所构建2种感染性克隆在转染相应细胞系后，能够有效复制、装配形成有感染性的病毒颗粒，且该病毒颗粒可在Vero细胞内传代增殖，其感染复制特征与亲本野毒株无显著性差异。本研究为进一步探索影响CHIKV感染、复制、传播和致病等关键机制研究奠定了基础。
关键词：基孔肯雅病毒;感染性克隆;反向遗传;T7 RNA聚合酶
基金资助：国家科技重大专项（项目号：ZDZX-2016-ZX10004222）,题目：非洲病毒性出血热实验室和血清流行病学调查~~
