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作者：刘冠雅;吴依依;刘士元;王梦微;张越;李兆卿;高尚卿;叶飞;陆柔剑;黄保英;谭文杰;
单位：包头医学院,公共卫生学院;传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室国家卫生健康委医学病毒和病毒病重点实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所;
摘要：本研究旨在明确HCoV-229E在多种细胞中的感染特征与复制动力学。首先比较了33℃和37℃下HCoV-229E在MRC-5中的致细胞病变效应、核酸增殖与感染活性等特征，确定病毒培养温度；通过RT-PCR(Real-time reverse transcription,rRT-PCR）比较了HCo -229E在不同种属与组织来源的13种细胞系（Huh7.5、He La、MRC-5、A549、RD、Hep-2、Calu3、Ha Cat-WT、Vero、LLC-MK2、MDCK、BHK-21、Mv1Lu）中的病毒RNA复制水平，评估了上述细胞对病毒的易感性；进一步探究其在易感细胞系中的致细胞病变效应（Cytopathic effect,CPE）、半数组织感染剂量（50%of tissue culture infectious dose,TCID_(50)）复制动力学和噬斑形成特性。研究发现，HCoV-229E以同等MOI感染MRC-5后，病毒RNA与TCID_(50)的复制增殖均表现为33℃优于37℃。病毒RNA复制动力学结果显示，13种细胞中的6种人源细胞（Huh7.5、HeLa、MRC-5、RD、A549、Hep-2）对HCo V-229E易感，但在Hep-2中的复制较差。CPE结果表明，Huh7.5与He La均在感染后48h观察到CPE，并于72h出现细胞变圆脱落，与MRC-5趋势一致；而A549和RD分别于72h和96h观察到CPE，但细胞脱落死亡情况较轻。病毒活性复制动力学显示，0.01与0.001MOI感染剂量下，HCo V-229E在Huh7.5中分别于24h和48h达到复制高峰（10~(6.96) TCID_(50)/m L和10~(6.65) TCID_(50)/mL,P<0.05）；在HeLa中分别于48h与72h达到复制高峰（10~(6.8) TCID_(50)/mL和10~(6.56) TCID_(50)/mL,P<0.05）；在A549中均在96h到达复制高峰（约10~(6.3) TCID_(50)/mL,P>0.05）；在RD细胞中均在72h到达复制高峰（10~(6.58) TCID_(50)/m L和10~(6.65) TCID_(50)/mL,P>0.05）。HCoV-229E可在Huh7.5、HeLa、A549、RD细胞中产生不同形态的空斑，其中He La细胞时间短（96h）、噬斑清晰易于计数，是HCoV-229E空斑实验的良好选择。本研究通过RT-PCR、CPE、病毒活性和噬斑特性系统展示了HCoV-229E在13种细胞中表现出不同感染特征与复制动力学，为深入研究HCoV-229E病原生物学和抗病毒药物筛选等提供了参考。
关键词：人冠状病毒229E;易感细胞系;复制;致病变效应;噬斑
基金资助：国家重点研发计划（项目号：2022YFC2304100）,题目：新冠与流感等大流行风险病原体多肽疫苗的研制;国家重点研发计划（项目号：2021YFA1201003）,题目：抗病毒纳米药物的体内外功能评价;国家重点研发计划（项目号：2022YFC2303401）,题目：潜在高危新病原风险识别的新技术体系研究~~
