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作者：王梅;甄珍;胡德宝;张林林;李新;郭益文;郭宏;丁向彬;
单位：天津农学院动物科学与动物医学学院,天津市农业动物繁育与健康养殖重点实验室;
摘要：牛骨骼肌卫星细胞是一种多功能干细胞，能修复受损的骨骼肌。蛋白质二硫键异构酶PDIA3在肌肉再生过程中起关键作用。本试验旨在研究PDIA3对牛骨骼肌卫星细胞增殖和成肌分化的影响。利用牛骨骼肌卫星细胞体外成肌分化模型，设计合成PDIA3的干扰模型，并构建PDIA3的过表达载体pcDNA3.1-PDIA3，检测其干扰和过表达效果。采用EdU染色法检测PDIA3表达量的改变对细胞增殖的影响，通过肌管形成状态检测对分化进程的影响，并采用RT-qPCR和Western Blot方法检测牛骨骼肌卫星细胞在RNA水平和蛋白水平上增殖标志因子和分化标志因子的变化，综合分析干扰和过表达PDIA3对牛骨骼肌卫星细胞增殖和分化的影响。结果显示：与对照组相比，干扰或过表达PDIA3后Pax7在mRNA和蛋白表达水平均无明显变化，EdU阳性细胞率无明显变化，表明PDIA3表达水平的改变对其增殖无明显影响。干扰PDIA3后，可发现肌管数量明显少于对照组，肌管直径明显变小，分化标志因子MyHC的RNA表达水平极显著降低，MyHC的蛋白表达水平显著降低；而过表达PDIA3后，可发现肌管数量明显多于对照组，肌管直径明显变大，且分化标志因子MyHC的RNA表达水平和蛋白水平均显著升高。以上结果表明PDIA3能正向调节牛骨骼肌卫星细胞的分化过程。本研究结果为PDIA3在肌肉发育的研究提供了一定的参考。
关键词：PDIA3;牛骨骼肌卫星细胞;细胞增殖;细胞分化
基金资助：国家自然科学基金项目（31772559）
