来源：期刊VIP网 时间：
作者：李伟建;李卓;赵茜;艾日夏提·地里夏提;刘娅兰;马秀玲;王莉;王旭光;
单位：新疆农业大学动物科学学院;
摘要：手工克隆技术（Handmade Cloning,HMC）是一种不需要显微操作仪的更为方便的克隆方法，但是其对于操作人员的要求更加严格。本文着重于对透明带消化时间、融合时间、供核类型、代数、饥饿与否几个关键节点进行优化。结果表明：链霉蛋白酶消化时间在70～105 s之间死亡率极显著低于处理时间大于105 s组（3.1%vs. 25.1%），胞质碎裂率极显著低于处理时间小于75 s组（2.1%vs. 72.0%）。另外，供核细胞为P0～P1代时，囊胚率极显著低于饥饿48h或0h的P2～P5代供核细胞（24%vs. 40.1%、39.8%）。在融合率方面，随着操作时间的加长，累加平均融合率呈现降低趋势。在供核的选择方面，使用脐带间充质干细胞获得的囊胚率极显著高于耳缘成纤维细胞（40.4%vs. 21.8%）。由此可见，绵羊HMC法克隆过程中，使用链酶蛋白酶处理75～105 s，融合时间控制在115 min之内，使用代数大于P2的间充质干细胞能够获得较高的囊胚率。
关键词：绵羊;体细胞核移植;手工克隆;链霉蛋白酶;脐带间充质干细胞
基金资助：新疆维吾尔自治区自然科学基金项目（2020D01A56）
