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作者：王珊珊;刘阳;任艳艳;王令;路宏朝;张涛;
单位：陕西理工大学生物科学与工程学院;陕南秦巴山区生物资源综合开发协同创新中心;秦巴特色肉制品质量提升与安全控制陕西省高校工程研究中心;陕西省四主体一联合镇巴腊肉校企联合研究中心;秦巴生物资源与生态环境省部共建国家重点实验室(培育);陕西省资源生物重点实验室;
摘要：研究旨在开发耐热纤维素酶，以提高畜禽对纤维素饲料的利用率和养殖经济效益。从蛋白质信息数据库UniProt中获取热纤梭菌（Clostridium thermocellum）葡聚糖外切酶CelS的序列信息，经信号肽删除和密码子优化，利用大肠杆菌表达系统，实现了CelS的过量表达。通过自诱导表达条件优化，有效提高了CelS可溶表达的比例。将胞内上清液通过镍离子亲和层析和热处理分离纯化获得可溶CelS，将胞内沉淀通过洗涤、变性和复性后获得包涵体复性CelS。酶学特性检测发现，两种表达形式CelS的酶活力无显著性差异，最适反应温度均为70℃，最适反应pH值为5.5～6.0，对无定形纤维素（PASC）的活性最高，对结晶纤维素（Avicel）和玉米秸秆（CS）次之。CelS与海栖热袍菌（Thermotoga maritima）葡聚糖内切酶EG12B协同作用水解CS，比单独水解酶活力提高了81.8%。试验结果表明，重组CelS表现出优越的耐热性能和纤维素水解活性，为进一步开发酶制剂提供了有力支持，有利于提高纤维素饲料的利用率。
关键词：热纤梭菌;;葡聚糖外切酶;;可溶表达;;包涵体;;酶学特性
基金资助：陕西省教育厅重点科学研究计划项目（项目编号：20JY006）
