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作者：于涵;刘美琳;王艺潼;王艳双;母润红;张丽华;
单位：吉林大学白求恩第一医院病理科;吉林大学白求恩第一医院神经内科;北华大学基础医学院;吉林雷宁食品药品检测技术服务有限公司;
摘要：目的：建立金钱白花蛇PCR-免疫胶体金试纸条快速分子鉴定方法，并组合成快速基因检测的试剂盒。方法：筛选基因组DNA的提取方法及试剂，根据金钱白花蛇mtDNA cytb基因设计种属特异性引物并标记，优化最佳反应条件，研发一体化PCR快速基因检测试剂盒，采用分子克隆及基因测序技术制备对照药材DNA克隆液，利用免疫胶体金试纸条进行结果检测，并对试剂盒的特异性、重现性、灵敏度、稳定性进行评价。结果：基因组DNA的完整性、浓度、纯度均满足PCR的要求，引物在退火温度57℃时，循环20次时，免疫胶体金试纸条显示金钱白花蛇对照药材及正品出现两条红色条带，混淆品及空白对照品仅出现一条红色条带。对照药材克隆测序结果与金钱白花蛇mtDNA cytb基因同源性为100%。一体化快速基因检测试剂盒的特异性、重现性、稳定性、灵敏度均更优于相同样品在琼脂糖凝胶电泳的结果。结论：PCR-免疫胶体金试纸条鉴定方法能够有效地识别金钱白花蛇及其混淆品，且操作简便快速、结果判断直观，更适合实地现场检测、具有良好的推广应用前景。
关键词：金钱白花蛇;;免疫胶体金试纸条;;分子克隆;;聚合酶链式反应(PCR);;真伪鉴定
基金资助：吉林省科技发展计划项目(20210401109YY,20210204185YY)
