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作者：郭晓旭;顾文源;赵云环;张帅;范京惠;左玉柱;
单位：河北农业大学动物医学院;河北省动物疫病预防控制中心;河北省兽医生物技术创新中心;
摘要：为了获得可溶性表达的牛冠状病毒病毒样颗粒疫苗，并对其进行免疫效果评价。本研究将5种分子伴侣pTf16、pG-Tf2、pG-KJE8、pGro7和pKJE7分别转入E.coli BL21(DE3)中制备伴侣感受态细胞，将携带乙肝病毒核心抗原的重组质粒pET-32a(+)-HBcAg-BCoV S1+S2转化至制备好的5种分子伴侣感受态细胞中，各种共表达菌株通过双抗板筛选、诱导剂诱导表达后，通过SDS-PAGE检测上清液是否表达来筛选有效的伴侣质粒。纯化共表达的重组蛋白，利用透射电镜观察是否形成病毒样颗粒(VLPs)。用制备好的VLPs乳化成疫苗免疫小鼠，采用ELISA方法检测免疫后小鼠血清中的IgG特异性抗体及细胞因子IFN-γ、TNF-α和IL-4的水平。结果显示：成功制备上清液表达的BCoV VLPs，将VLPs乳化成疫苗后免疫小鼠，小鼠产生的BCoV IgG抗体水平和细胞因子水平均显著高于对照组(P<0.05)。结果表明，分子伴侣pG-KJE8在16 ℃条件下可以更好地促进牛冠状病毒病毒样颗粒的可溶性表达，且与分子伴侣共表达的BCoV VLPs具有免疫活性，对制备效价高、成本低的牛冠状病毒样颗粒疫苗具有重要意义。
关键词：牛冠状病毒病毒样颗粒;;可溶性表达;;分子伴侣质粒
基金资助：河北农业大学精准畜牧学科群建设项目(1090064);; 河北省农业产业技术体系奶牛创新团队项目(HBCT2018120406);河北省农业产业技术体系肉牛创新团队项目(HBCT2018130405)
