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作者：史永红;陈秋生;
单位：南京农业大学动物医学院;中国农业科学院上海兽医研究所;
摘要：超薄切片技术在兽医领域是极为重要的研究手段，但其通用制备程序在面对不同样品时，常难以取得高质量结果。本研究立足传统电镜技术，先优化羊皮肤超薄切片技术，再将优化方法应用于DTMUV感染鸭脑组织及BHK-21细胞、微孢子虫感染的三疣梭子蟹肌肉组织和PRV感染的Vero细胞样品中，进行应用验证。优化方案包括：在常规固定液中添入4%多聚甲醛改良固定液，全程以丙酮作脱水剂，增设30%脱水步骤，100%脱水按10、15、20、30 min时间梯度进行，浸透时长延长至常规双倍并增用一部纯包埋剂。结果显示：经优化，能稳定获取平整且厚度均一的切片；同时，采用20%乙醇配制醋酸双氧铀溶液并延长染色时间至20 min，使得切片干净平整、无污染，染色反差良好；以75目大孔径载网捞片，显著扩大切片可观察区域。这些优化手段能制作出大视野、高质量的超薄切片，并在上述样品中得到验证，表明优化后的超薄切片技术可满足兽医超微形态学研究需求。
关键词：超薄切片;;透射电镜;;皮肤;;鸭坦布苏病毒;;微孢子虫;;伪狂犬病毒
