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作者：刘禹含;叶雨濛;麦嘉迅;程松;孟春春;朱杰;刘光清;王勇;巴音查汗·盖力克;李传峰;
单位：新疆农业大学动物医学院;中国农业科学院上海兽医研究所;安徽农业大学动物科技学院;广州市海珠区立德动物医院;德国纳博科临动物临床中国检验实验室;
摘要：本研究利用原核表达系统表达犬副流感病毒(CPIV)F蛋白，并制备CPIV-F蛋白多克隆抗体。依据CPIV SH2021株F基因设计引物，扩增获得去除信号肽的F基因片段，并构建了重组表达质粒pET-42a-CPIV-F，经测序验证正确后转化至大肠杆菌BL21中，经IPTG诱导表达重组蛋白，并优化了诱导剂浓度及诱导时间。采用包涵体粗提纯化法对重组CPIV-F蛋白进行纯化，并测定了重组蛋白浓度。用纯化的重组CPIV-F蛋白制备其兔源多克隆抗体，通过Western blot和ELISA鉴定了多克隆抗体特异性和效价。结果显示：试验成功构建pET-42a-CPIV-F原核表达质粒并表达出重组CPIV-F蛋白；SDS-PAGE法和Western blot结果表明，重组CPIV-F蛋白可在大肠杆菌中的表达，大小为89 kDa，优化后的IPTG终浓度为1 mmol/L，诱导4 h表达量最大，重组蛋白浓度为2.3 mg/mL，兔抗CPIV-F抗体可以与重组蛋白发生特异性反应；间接ELISA测得兔抗CPIV-F蛋白多克隆抗体效价为1∶102 400。本研究制备的兔源多克隆抗体特异和高效，表明F蛋白具有良好的免疫原性，为进一步研究CPIV F蛋白的生物学功能及建立相关的免疫学检测方法奠定了基础。
关键词：犬副流感病毒;;F基因;;原核表达;;多克隆抗体
基金资助：国家自然科学基金项目(32000109);; 上海市青年科技英才扬帆计划项目(20YF1457700);; 上海市自然科学基金项目(22ZR1476300);; 上海市市级科技重大专项(ZD2021CY001);; 中央级公益性行业科院所基本科研业务费(2022JB01)
