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作者：邓可辉;陈志飞;俞婷;王志林;王修武;郭智轩;李松倍;魏文康;贺东生;
单位：华南农业大学兽医学院广东省动物源性人兽共患病预防与控制重点实验室;广东省农业科学院农业生物基因研究中心;岭南现代农业科学技术广东省实验室茂名分中心;岭南现代农业科学技术广东省实验室肇庆分中心;
摘要：本研究成功建立了检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪丁型冠状病毒(PDCoV)3种猪冠状病毒的反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP)，为现场快速诊断提供技术支持。根据GenBank公布的PEDV、TGEV、PDCoV的N基因保守序列作为靶序列设计了3套LAMP检测引物，并通过反应条件优化、敏感性试验、特异性试验以及临床样品检测，分别建立了3种快捷、敏感的猪冠状病毒RT-LAMP检测方法。结果显示：所建立的PEDV、TGEV、PDCoV 3种冠状病毒RT-LAMP检测方法的最佳反应温度分别为65 ℃、63 ℃、63 ℃，3种检测方法均可在45 min左右完成恒温扩增，扩增出特异性阶梯状条带，且不依赖于PCR仪等昂贵设备，仅需普通恒温装置即可反应。所建立的检测方法对PEDV、TGEV、PDCoV分别可以达到的检测下限为20、23、10拷贝/μL，敏感性较好；所建立的3种检测方法分别只检测出PEDV、TGEV、PDCoV，且与常见的猪源性病毒均无交叉反应，特异性好。用所建立的3种RT-LAMP检测方法对45份猪腹泻病料进行检测，PEDV、TGEV、PDCoV阳性率分别为33.33%(15/45)、22.22%(10/45)、13.33%(6/45)，均比常规RT-PCR检测阳性率高。与常规RT-PCR相比较，本研究建立的方法操作简便快速、经济，且检测设备门槛低，更适用于基层临床检测。
关键词：猪;;冠状病毒;;反转录环介导等温扩增;;检测方法
基金资助：广东省科技计划(P20211154-0302);; 茂名实验室科研启动项目(2021TDQD002);; 科技创新战略专项资金(202131TD)
