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作者：朱媛媛;许榜丰;闫鸣昊;刘芹防;滕巧泱;苑纯秀;李雪松;李泽君;
单位：中国农业科学院上海兽医研究所;
摘要：本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术，首先靶向犬全基因组设计合成转录sgRNA的DNA文库，并将DNA文库全部克隆于lentiCRISPR v2慢病毒转移载体上，高通量测序结果显示文库覆盖度高、均一性良好。将质粒文库和慢病毒包装系统质粒共转染293T细胞，收取含慢病毒样病毒的上清液感染MDCK细胞，在最适浓度嘌呤霉素筛选下，收集嘌呤霉素抗性细胞，冻存于-80℃，提取一部分细胞的基因组，通过PCR扩增转录sgRNA的DNA，将PCR产物插入到T载体后，挑取单克隆菌落，测序表明细胞文库中转录的sgRNA具有较好的覆盖度。本实验成功构建了犬全基因组范围转录sgRNA的质粒文库，并成功构建了MDCK细胞全基因组范围的基因编辑细胞库，该文库可作为后续筛选病毒复制关键宿主因子的细胞平台。
关键词：CRISPR/Cas9;;MDCK细胞系;;全基因组;;基因编辑
基金资助：中国农业科学院创新工程经费;; 上海市科技兴农项目(2021-02-08-00-12-F00746);; 中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(JB03)
