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作者：严杰聪;王帅勇;王曼茱;王娟;荣新利;邢燕茹;虞凌雪;周艳君;单同领;童武;郑浩;刘长龙;童光志;于海;
单位：中国农业科学院上海兽医研究所;江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心;
摘要：Cap蛋白作为猪圆环病毒2型(PCV2)的主要结构蛋白，构成病毒的核衣壳，是PCV2的主要免疫保护性抗原，在PCV2血清学诊断中具有重要意义。本研究根据PCV2的ORF2基因序列设计特异性引物，通过PCR方法扩增得到去核定位信号肽的ORF2基因，并通过同源重组将其克隆至原核表达载体pCold-Ⅰ中，经测序鉴定成功获得重组质粒 pCold-Ⅰ-Cap。将重组质粒转化至感受态细胞BL21中进行表达，通过考马斯亮蓝染色以及免疫印迹试验检测Cap蛋白的表达，同时将纯化后的重组蛋白通过优化反应条件建立检测PCV2血清抗体的间接ELISA方法。结果表明：重组去核定位信号肽Cap蛋白可溶性表达且可以与PCV2阳性血清特异性结合，通过探索不同蛋白包被浓度以及不同一抗孵育浓度初步建立了间接ELISA检测方法，进而为PCV2抗体的有效监测奠定基础。
关键词：猪圆环病毒2型;;Cap蛋白;;同源重组;;表达纯化;;ELISA
基金资助：国家自然科学基金面上项目(31970175);; 国家生猪现代产业技术体系建设项目(NYCYTX-009);; 中国农业科学院创新工程“猪病毒性繁殖障碍综合症团队”项目
