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作者：雷蕴;马涛;万良硕;王世革;张翠娟;程方圆;郭文静;窦永青;
单位：河北中医药大学;石家庄市第二医院;河北省中医院;
摘要：目的:探讨微量元素铜在补阳还五汤促进小鼠后肢缺血后血管新生中的作用及机制。方法:60只10-12周龄C57BL/6小鼠适应性喂养1 w,随机分为正常对照组、模型对照组、阳性对照贝前列素钠18μg/kg组、补阳还五汤10、20、40 g/kg组，每组10只。除正常对照组外，行股动脉结扎建立后肢缺血模型，灌胃给予相应药物或纯净水，连续14 d。采用激光散斑血流灌注成像仪检测小鼠后肢血流灌注情况；腓肠肌冰冻切片染CD31抗体标记的毛细血管；应用铜比色法试盒检测腓肠肌铜浓度。低氧培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs);观察补阳还五汤含药血清及铜离子螯合剂TTM对内皮细胞增殖、迁移、成管等血管新生功能、血管内皮生长因子A (VEGFA)表达及铜浓度的影响；应用染色质免疫沉淀(ChIP)和荧光素酶报告基因分析补阳还五汤含药血清及TTM对Vegfa基因转录的影响。结果:与正常对照组比较，模型对照组小鼠后肢缺血后血管新生明显增加(P<0.05),缺血腓肠肌铜浓度显著降低(P<0.01);与模型对照组比较，给药各组小鼠后肢缺血后血管新生增加，以补阳还五汤20 g/kg组效果最佳(P<0.01),20 g/kg组缺血腓肠肌的铜浓度显著升高(P<0.01)。与正常对照血清组比较，15 g/kg补阳还五汤10%含药血清处理的低氧环境下HUVECs,铜浓度升高，增殖、迁移、成管作用显著增强(P<0.01),VEGFA表达上调(P<0.05),而TTM抑制了这些作用(P<0.01);ChIP和荧光素酶报告基因结果显示，补阳还五汤10%含药血清促进HIF-1α结合活性及其介导的Vegfa基因转录(P<0.01),而TTM阻断此作用(P<0.01)。结论:补阳还五汤通过升高内皮细胞铜离子浓度，调节铜稳态，上调HIF-1α介导的Vegfa转录，增加内皮细胞增殖、迁移和成管能力，进而推动缺血组织血管新生，恢复缺血组织血液灌注。
关键词：补阳还五汤;;缺血;;铜稳态;;血管新生;;血管内皮生长因子A
基金资助：河北省医学科学研究课题计划项目(编号：20220183);; 国家自然科学基金项目(编号：82474514);; 河北省自然科学基金项目(编号：H2021423047);; 河北省中医药类科学研究课题计划项目(编号：2024093);; 河北中医药大学燕赵医学研究项目(编号：Y2222023010)
