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作者：马骏;胡佳惠;王怀弟;郭影;刘兴国;李坚;刘亚鹏;任一杰;贾继禧;
单位：甘肃中医药大学药学院;国家中医药管理局中医药科研三级实验室中药药理实验室;甘肃省药品检验研究院;兰州市食品药品检验检测研究院;甘肃陇神戎发药业股份有限公司;
摘要：目的:本研究通过网络药理学和动物实验探讨元胡止痛滴丸抗抑郁的作用及机制。方法:通过网络药理学方法获得元胡止痛滴丸治疗抑郁症的可能靶点和信号通路。动物实验将60只大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、元胡止痛滴丸0.38、0.75、1.5 g/kg组、阳性药盐酸氟西汀胶囊3.3 mg/kg组，采用慢性不可预知温和刺激(chronic unpredictable mild stimulation, CUMS)联合孤养法复制抑郁模型；在第15 d和第30 d进行糖水消耗试验、强迫游泳试验及水迷宫试验；采用RT-qPCR法检测Cam、CamkⅡ、Creb mRNA的表达；Western blot法检测大鼠海马组织钙调蛋白(CaM)、钙调蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)、环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)、p-CREB蛋白表达；尼氏染色观察海马组织神经元损伤情况。结果:网络药理学预测获得元胡止痛滴丸活性成分75个，抗抑郁的潜在靶点94个。PPI网络互作分析发现，雌激素受体1(ESR1)、酪氨酸蛋白激酶SRC(SRC)、前列腺素G/H合成酶2(PTGS2)是“药物-疾病”交集靶点中的关键靶点。GO富集分析结果中细胞组成(CC)涉及树突、树突树、突触后等；生物过程(BP)涉及对激素的反应、细胞对氮化合物的反应、循环系统过程等；分子功能(MF)涉及氧化还原酶活性、蛋白结构域特异性结合、蛋白激酶活性等。KEGG富集分析涉及的关键通路包括神经活性配体-受体相互作用、癌症途径、钙信号通路、PI3K/AKT信号通路、cGMP/PKG信号通路等。动物实验结果表明，与正常对照组相比，模型对照组大鼠糖水偏好率下降，强迫游泳不动时间增加，水迷宫逃避潜伏期时间增加、穿越平台次数减少，海马组织中Cam、CamkⅡmRNA表达和CaM、CamkⅡ、p-CREB蛋白表达明显下调(P<0.05或P<0.01),大鼠海马CA3区锥体细胞大小不一致，排列疏松不整齐，尼氏体减少，染色较浅；与模型对照组比较，元胡止痛滴丸0.75、1.5 g/kg组大鼠的海马组织Cam、CamkⅡmRNA表达上调，CaM、CaMKⅡ、p-CREB蛋白表达上调，大鼠潜伏期明显减少(P<0.05或P<0.01),元胡止痛滴丸各剂量组穿越平台次数明显增加(P<0.05或P<0.01);第30 d元胡止痛滴丸各剂量组大鼠的强迫游泳不动时间明显减少，海马组织Cam、CamkⅡmRNA表达上调(P<0.05或P<0.01),CaM、CaMKⅡ、p-CREB蛋白表达显著上调(P<0.01),元胡止痛滴丸0.38、0.75g/kg组大鼠海马CA3区锥体细胞数量明显增加，形态较规则，排列整齐，元胡止痛滴丸1.5 g/kg组锥体细胞大小较一致，排列均匀整齐紧密，尼氏体形态规则，染色加深。结论:元胡止痛滴丸具有抗抑郁作用，其作用机制与上调CaM/CaMKⅡ/CREB信号通路和改善海马组织神经元损伤有关。
关键词：元胡止痛滴丸;;抑郁症;;慢性不可预知温和刺激;;网络药理学;;钙信号通路;;行为学
基金资助：甘肃省药品监督管理局科研项目(编号：2023GSMPA025);; 甘肃省中医药管理局科研项目(编号：GZKZ-2023-41);; 兰州市科技局人才创新创业项目(编号：2022-RC-15)
