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作者：金婷;汪颖琦;詹群璋;梁依敏;何龙;庄昆海;李培武;米红;刘凤斌;
单位：广州中医药大学第一临床医学院;广州中医药大学岭南医学实验研究中心;广州中医药大学第三临床医学院;广州中医药大学第一附属医院;广州中医药大学第一附属医院白云医院脾胃病科;广州中医药大学第一附属医院岭南脾胃病研究所;
摘要：目的:基于cGAS/STING信号通路介导肠上皮细胞焦亡,探讨肠安方治疗溃疡性结肠炎小鼠的作用机制。方法:将48只C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、肠安方5、10、20g/kg组及5-氨基水杨酸0.1g/kg组。正常对照组小鼠给予生理盐水,其余小鼠给予2%DSS溶液自由饮水7d建立急性溃疡性结肠炎小鼠模型,造模成功后,各组小鼠给予相应剂量肠安方灌胃治疗,连续干预5d。试验期间观察记录小鼠的体质量、便血情况,计算DAI;试验结束后,HE染色观察小鼠结肠组织病理学改变;采用ELISA法检测小鼠血清中白细胞介素1β(IL-1β)、IL-18含量;RT-qPCR法检测小鼠结肠组织中干扰素刺激基因(Sting)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(Nlrp3)、切割膜穿孔蛋白(Gsdmd)、半胱天冬蛋白酶-1(Caspase1)mRNA的表达;免疫组化法检测小鼠结肠组织STING蛋白表达;免疫荧光法检测小鼠结肠组织GSDMD蛋白表达;蛋白免疫印迹法检测结肠组织cGAS/STING通路及焦亡相关蛋白的表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组小鼠出现便血及黏液血便症状,体质量显著减轻(P<0.01),结肠长度显著缩短(P<0.01),血清炎症因子IL-1β、IL-18含量显著升高(P<0.01),结肠病理显示,结肠炎性细胞浸润明显,可见炎性水肿,结肠组织中Sting、Nlrp3、Caspase1、Gsdmd mRNA表达上调(P<0.01),结肠组织中STING蛋白阳性表达及GSDMD免疫荧光表达水平显著升高(P<0.01),cGAS/STING通路及焦亡相关蛋白表达显著上调(P<0.01);与模型对照组比较,肠安方各组小鼠黏液血便显著减轻,体质量降低(P<0.01),病理评分显著降低,结肠细胞炎性浸润减轻(P<0.01),血清IL-1β、IL-18含量显著降低(P<0.01),STING蛋白阳性表达及GSDMD免疫荧光表达水平显著下降(P<0.01),结肠组织Sting、Nlrp3、Caspase-1、Gsdmd mRNA表达显著下调(P<0.01),cGAS/STING通路及焦亡蛋白表达显著下调(P<0.01)。结论:肠安方可降低溃疡性结肠炎小鼠炎性因子表达,改善黏膜炎症,其机制可能与抑制cGAS/STING信号通路介导的结肠上皮细胞焦亡有关。
关键词：肠安方;;溃疡性结肠炎;;环磷酸鸟苷/腺苷酸合成酶/干扰素基因刺激因子信号通路;;焦亡;;黏膜炎症
基金资助：国家自然科学基金项目(编号:8190140285、82404958、82304982、8200151442);; 国家中医药管理局第七批全国老中医药专家学术经验继承工作——刘凤斌广东省名中医传承工作室;; 广东省基础与应用基础研究基金项目(编号:2023A1515110802)
