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作者：林飞宁;黄丽华;林超;杨直;李翠云;熊尚全;
单位：福建中医药大学附属人民医院心血管科;福建中医药大学附属人民医院检验科;福建中医药大学附属人民医院病理科;
摘要：目的:通过腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)介导的自噬探讨康达心减轻异丙肾上腺素(ISO)诱导心肌细胞损伤机制。方法:制备康达心含药血清，筛选康达心含药血清干预的最佳浓度和时间；采用不同浓度康达心含药血清预处理H9c2心肌细胞2 h,加入终浓度为10μmol/L的ISO培养24 h。CCK-8法检测细胞存活率；流式细胞术检测细胞凋亡情况；PCR法检测细胞心房利钠肽(Anp)基因表达；蛋白质印迹法检测细胞p-AMPK/AMPK、p-mTOR/mTOR、微管相关蛋白1轻链3 (LC3)-Ⅱ、LC3-Ⅰ、自噬调节蛋白-1(BECLIN-1)表达；透射电镜观察细胞自噬小体。使用AMPK抑制剂多索吗啡进一步验证康达心与AMPK/mTOR信号通路关系。结果:与完全培养基组相比，18 g/kg康达心含药血清5%、10%组24 h细胞存活率无明显变化，选择10%含药血清干预24 h作为实验最佳条件，5%含药血清作为梯度对比浓度。与空白对照组比较，模型对照组细胞存活率明显降低，细胞凋亡率增加及Anp基因表达上调，p-AMPK蛋白表达下调，p-mTOR蛋白表达上调，自噬相关蛋白(LC3II/I、BECLIN-1)表达下调，自噬小体数量减少(P<0.05或P<0.01),提示心肌细胞损伤模型造模成功；与模型对照组比较，18 g/kg康达心含药血清5%、10%组细胞存活率显著升高，细胞凋亡率降低，Anp基因表达下调，p-AMPK蛋白、自噬相关蛋白(LC3II/I、BECLIN-1)表达上调，自噬小体数量明显增加，p-mTOR蛋白表达显著下调(P<0.05)。加入AMPK抑制剂多索吗啡后，康达心激活自噬和减轻心肌损伤的作用减弱(P<0.05)。结论:康达心可促进自噬改善ISO诱导心肌损伤，其机制可能与AMPK/mTOR信号通路有关。
关键词：康达心;;自噬;;腺苷酸活化蛋白激酶;;哺乳动物雷帕霉素靶蛋白
基金资助：福建省自然科学基金项目(编号：2023J01830);; 福建中医药大学优势学科专项课题(编号：X2022008-专项)
