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作者:姚凤云;姜劼琳;韩瑶瑶;张凯茵;李雯;杨红芳;王琳;崔言坤;
单位:江西中医药大学中医学院;江西省方-证研究重点实验室;南昌市方-证对应免疫及代谢疾病防治重点实验室;
摘要:目的 探讨甘草附子汤对顺铂诱导RSC96(大鼠雪旺细胞)线粒体功能和凋亡的影响。方法 将RSC96细胞随机分为正常组、模型组、阿司匹林组、甘草附子汤组、辛味药组和甘味药组,正常组和模型组给予10%空白血清,各给药组分别给予10%含药血清。预给药4 h后,除正常组外其余各组加入0.5μg/mL顺铂造模,24 h后检测各组细胞存活率、细胞凋亡率、SOD活性及H_2O_2、ATP水平,ELISA法检测GSH-Px活性及MDA、Cyt-C、PGC-1α水平,Western blot法检测DRP1、p-DRP1、Bcl-2、Bax蛋白表达,RT-qPCR法检测DRP1、Bcl-2、Bax mRNA表达,免疫荧光法检测MFN1、MFN2表达。结果 与正常组比较,模型组细胞存活率降低(P<0.01),细胞凋亡率升高(P<0.01),SOD、GSH-Px活性及ATP、PGC-1α水平降低(P<0.01),MDA、H_2O_2水平升高(P<0.01),p-DRP1/DRP1、Bax蛋白及DRP1、Bax mRNA表达升高(P<0.01),Bcl-2 mRNA及MFN1、MFN2蛋白荧光表达降低(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,甘草附子汤组24 h细胞存活率升高(P<0.05),细胞凋亡率降低(P<0.01),SOD、GSH-Px活性及ATP、PGC-1α水平升高(P<0.05,P<0.01),MDA、H_2O_2水平降低(P<0.05,P<0.01),p-DRP1/DRP1、Bax蛋白及DRP1、Bax mRNA表达降低(P<0.01),Bcl-2 mRNA及MFN1、MFN2蛋白荧光表达升高(P<0.05,P<0.01);甘味药组细胞凋亡率降低(P<0.01),GSH-Px活性及ATP水平升高(P<0.01),MDA水平降低(P<0.01),p-DRP1/DRP1、Bax蛋白及DRP1 mRNA表达降低(P<0.01),Bcl-2 mRNA及MFN1蛋白荧光表达升高(P<0.01);辛味药组GSH-Px活性及ATP升高(P<0.01),MDA水平降低(P<0.01),H_2O_2水平升高(P<0.05),PGC-1α水平降低(P<0.01),p-DRP1/DRP1、Bax蛋白表达降低(P<0.01)。结论 甘草附子汤可通过“辛”“甘”配伍来改善顺铂诱导RSC96细胞线粒体功能障碍和细胞凋亡,其机制可能与抑制DRP1磷酸化而减少线粒体分裂,上调MFN1、MFN2表达而促进线粒体融合有关。
关键词:甘草附子汤;;RSC96细胞;;甘味;;辛味;;线粒体功能;;细胞凋亡;;DRP1;;MFN1/2
基金资助:国家自然科学基金项目(82104725);; 江西省教育厅科学技术研究项目(GJJ211245);; 江西省中医药管理局科技计划项目(2021B708)