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作者：郝羚伦;张艳;彭梦薇;桑亚洲;陈玉龙;刘燕;吴耀松;
单位：河南中医药大学河南省中医方证信号传导重点实验室,河南省中医方证信号传导国际联合重点实验室;天津中医药大学;华中科技大学;
摘要：目的 研究六君子汤改善肿瘤环境下C2C12成肌细胞分化的分子机制，为健脾和胃法治疗肿瘤恶病质肌肉萎缩提供实验基础。方法 诱导成肌细胞C2C12分化，倒置显微镜观察分化后肌管长度；成肌细胞C2C12与肺癌细胞Lewis共培养，分为空白组、模型组、叉头框蛋白O1(forkhead box protein O1,FoxO1)抑制剂组、六君子汤组、联合用药组，蛋白免疫印迹法(western blot, WB)检测C2C12细胞成肌分化抗原(myogenic differentiation antigen, MyoD)的表达及与过氧化物酶体增殖物受体γ辅助激活因子α(peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator 1-alpha, PGC-1α)/FoxO1通路相关的蛋白表达；电子显微镜观察C2C12细胞线粒体数量及超微结构的变化；流式细胞术(flow cytometry, FCM)观测C2C12细胞线粒体膜电位的变化；实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)法检测C2C12细胞PGC-1α/FoxO1通路相关分子mRNA。结果 C2C12细胞于分化48h肌管横径最长；与空白组比，模型组C2C12细胞MyoD蛋白表达明显减少(P<0.05),线粒体数量减少(P<0.05),线粒体双层膜皱曲不清晰甚至呈C形或基质肿胀，线粒体嵴数量减少、排列紊乱、断裂或溶解消失成空泡状，线粒体膜电位降低，细胞凋亡率显著升高(P<0.05),线粒体转录因子A(mitochondrial transcription factor A,tFAM)的mRNA表达明显降低(P<0.05),FoxO1蛋白表达明显增高，PGC-1α、脂肪和肥胖相关基因(fat mass and obesity-associated gene, FTO)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin, mTOR)、tFAM蛋白表达明显减少(P<0.05);与模型组比较，六君子汤组C2C12细胞MyoD蛋白表达明显增高，FoxO1抑制剂组、六君子汤组、联合用药组中C2C12细胞线粒体数量显著增多(P<0.05),线粒体双层膜结构正常，线粒体膜电位升高，细胞凋亡率显著降低(P<0.05),联合用药组C2C12细胞mTOR和tFAM mRNA表达明显增加(P<0.05),FoxO1抑制剂组、六君子汤组及联合用药组中C2C12细胞FoxO1蛋白表达明显减少，PGC-1α、FTO、mTOR、tFAM蛋白表达明显增高(P<0.05);与六君子汤组比较，联合用药组C2C12细胞PGC-1α蛋白表达升高(P<0.05)。结论 六君子汤通过调控PGC-1α/FoxO1信号通路，能维持线粒体功能，改善肿瘤环境下成肌细胞分化。
关键词：六君子汤;PGC-1α/FoxO1;线粒体;肿瘤恶病质;肌肉萎缩
基金资助：国家自然科学基金项目(82074313); 河南省科技攻关项目(192102310160); 河南省高等学校重点科研项目(23A360024); 河南省中医学“双一流”创建科学研究项目(HSRP-DFCTCM-2023-1-28)
