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作者：袁士雅;叶晨英;陈亿婷;何婷;王敏;农桂龙;周改莲;
单位：广西中医药大学;
摘要：目的 用斑马鱼模型对生栀子及6种不同炮制程度栀子水提物进行急性毒性及肝肾毒性研究，探索炮制程度对栀子毒性的影响。方法 以受精后3 d(3 dpf)发育正常的AB系斑马鱼为对象进行急性毒性研究，对生品(sp)及6种不同炮制程度栀子水提物(pz1、pz2、pz3、pz4、pz5、pz6)分别设置6个不同剂量浓度，统计斑马鱼72 h死亡率。用GraphPad Prism 9.0软件制作量-毒曲线，计算半数致死浓度(LC_(50))和10%致死浓度(LC_(10))。以受精后4 d(4 dpf)发育正常的gz15Tg/+(AB)肝脏荧光蛋白转基因斑马鱼为对象进行肝损伤研究。分别设置低(LC_0)、中(LC_(10))、高(LC_(20))3个剂量浓度组，设对乙酰氨基酚组，以胚胎水为空白组。给药72 h后观察斑马鱼肝脏形态和荧光面积变化，检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、肌酐(Cr)和尿素氮(BUN)活性。结果 急性毒性实验结果显示，生品及6种不同炮制程度栀子水提物LC_(50)分别为0.042、0.049、0.053、0.064、0.050、0.058、0.058 g·L~(-1);LC_(10)分别为0.024、0.025、0.033、0.038、0.036、0.036、0.039 g·L~(-1)。肝肾损伤实验结果表明，与空白组比较，对乙酰氨基酚组的斑马鱼肝脏形态变形和荧光面积减小(P<0.01),ALT和AST活性升高(P<0.01),表明对乙酰氨基酚对斑马鱼有肝毒性。sp低、中、高剂量组斑马鱼肝脏形态变化和荧光面积减少(P<0.01),ALT和AST活性升高(P<0.01,P<0.05),BUN和Cr活性升高(P<0.05),表明生品对斑马鱼有肝肾毒性。pz1、pz2、pz3中、高剂量浓度组斑马鱼肝脏形态变化和荧光面积减少(P<0.01),pz1的ALT和AST活性升高(P<0.01),BUN和Cr活性升高(P<0.01,P<0.05),pz2、pz3的ALT低、中、高剂量组活性升高(P<0.05,P<0.01),AST中、高剂量组活性升高(P<0.05,P<0.01)。pz4、pz5、pz6低、中剂量组斑马鱼肝脏形态变化和荧光面积无明显变化，高剂量组有变化(P<0.05)。表明pz4、pz5、pz6低、中剂量组对斑马鱼肝脏无明显影响，高剂量组有肝损伤。pz4中、高剂量组ALT、AST升高(P<0.05,P<0.01);pz5、pz6的ALT活性降低无显著影响，AST高剂量组有肝损伤(P<0.01,P<0.05)。pz3、pz5高剂量组BUN和Cr活性升高(P<0.01,P<0.05),pz4高剂量组BUN和Cr活性升高(P<0.01)。表明sp及pz1～pz5不同炮制程度不同剂量浓度对斑马鱼肝脏及肾脏均有不同程度的损伤。pz6的3个剂量浓度组斑马鱼ALT、BUN、Cr及AST低、中剂量组均无肝肾损伤。结论 栀子肝肾损伤与炮制程度和给药剂量有关。生品与不同炮制程度栀子均不同程度地表现出一定的肝肾损伤，规范炮制条件可能是实现栀子用药安全的重要措施。
关键词：栀子;炮制;斑马鱼;急性毒性;肝肾损伤
基金资助：国家中医药管理局中药炮制技术传承基地(广西)项目(2022); 广西中药药效研究重点实验室运行补助项目(20-065-38);广西中药药效研究重点实验室系统性研究开放课题项目(19-245-1-A5); 广西中医药大学自然科学研究杰出青年基金项目(2021JQ001);广西中医药大学岐黄工程高层次人才团队培育项目(202404);广西中医药大学研究生创新课题项目(YCSZ2022007);广西中医药大学大学生创新课题项目(S202210600046)
