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作者：蒋宇欣;李巍;徐应佳;赖玉珍;张迩馨;刘文婧;李佳萌;宋悦;林思嘉;王雪琴;周培泽;吕瑞辰;孙一仟;李越希;
单位：南京医科大学公共卫生学院;中国药科大学基础医学与临床药学院;东部战区疾病预防控制中心;中国药科大学生命科学与技术学院;中国药科大学药学院;中国药科大学工学院;
摘要：登革热是由登革病毒（Dengue virus,DENV）感染引起的急性虫媒传播疾病。早期诊断和控制疾病发展可以降低严重登革热的发病率和死亡率。虽然已有的DENV NS1抗原检测试剂可以早期诊断登革热，但都不能区分DENV四种血清型。本研究通过制备DENV2 NS1抗原的单克隆抗体，筛选特异性识别DENV2 NS1的抗体对，建立特异检测DENV2 NS1抗原的双抗体夹心ELISA技术，用于DENV NS1抗原的快速分型检测。利用昆虫细胞-杆状病毒系统表达重组DENV2 NS1蛋白（rDENV2 NS1），通过镍柱亲和层析纯化rDENV2 NS1。用纯化的rDENV2 NS1蛋白免疫BALB/c鼠，分离免疫小鼠的脾脏淋巴细胞与SP2/0细胞融合，筛选阳性杂交瘤细胞系，获得三株阳性单克隆抗体F1、B12、A2，亚型依次为IgG1（κ）、IgG2a（κ）、IgG1（κ），间接ELISA和Western blot鉴定结果显示B12、A2单抗能与rDENV2 NS1特异性结合，F1单抗与其他DENV血清型NS1有交叉反应。细胞培养生产纯化单克隆抗体，HRP标记单抗，双抗体夹心ELISA法筛选可特异识别DENV2 NS1抗原的抗体对。结果显示，B12作为捕获抗体，A2-HRP作为检测抗体，能特异性结合DENV2 NS1蛋白，与其他DENV血清型NS1没有交叉反应，成功筛选出特异性识别DENV2型NS1的配对抗体，并初步建立了特异检测DENV2 NS1抗原的双抗体夹心ELISA检测技术，为研发登革病毒早期分型快速诊断试剂奠定基础。
关键词：登革病毒;;NS1蛋白;;单克隆抗体;;配对抗体
