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作者：张世尚;谢丽琼;何正秋;
单位：苍溪县中医医院;
摘要：研究荷载MYCN基因小发夹RNA(shMYCN)的溶瘤腺病毒对p53突变和MYCN基因扩增的食道肿瘤细胞株TE10的生长抑制作用。用BglII从pCAl3-shMYCN酶切出包含CMV启动子及shMYCN模板DNA序列的表达框，将此表达框克隆进选择性增殖腺病毒质粒pZD55，构建重组质粒pZD55-shMYCN。将pZD55-shMYCN与含有腺病毒右臂的质粒pBHGE3共转染293细胞。将病毒ZD55-shMYCN、Ad-shMYCN、ZD55-EGFP大量扩增，氯化铯梯度离心纯化，测病毒滴度，将293细胞铺于30～40个10 cm培养皿，每块板分别加入病毒50μL,4～7 d待细胞全部病变后收集病毒，CsCl高速梯度法纯化病毒，空斑计数法测定滴度。用MOI=10的3种病毒感染TE10细胞。48 h后提取蛋白，经电泳、转膜后杂交，一抗分别为兔抗人E1A单抗、鼠抗人MYCN单抗、鼠抗人caspase-3单抗，二抗分别为碱性磷酸酶偶联鼠抗兔多抗、碱性磷酸酶偶联兔抗鼠多抗、碱性磷酸酶偶联兔抗鼠多抗，以氮兰四唑/5一溴4一氯3一吲哚磷酸（NBT/BCIP）显色，图像处理仪分析处理。感染ZD55-shMYCN、ZD55-EGFP的TE10细胞表达E1A，感染Ad-shMYCN的TE10细胞不表达。在TE10细胞，ZD55-shMYCN较Ad-shMYCN和ZD55-EGFP能更加明显的抑制MYCN蛋白的表达。三种病毒感染对抑制TE10细胞增殖均有一定作用，但ZD55-shMYCN的作用效果最强，呈时间、剂量依赖。ZD55-shMYCN、Ad-shMYCN及ZD55-EGFP感染的TE10细胞凋亡率（%）分别为（56.80±6.1）、（29.60±3.4）、（31.20±3.8），每种病毒之间有显著差异（P<0.01），由此可见ZD55-shMYCN感染的TE10细胞凋亡率最高。ZD55-shMYCN较Ad-shMYCN和ZD55-EGFP能更加有效的促进procaspase-3的剪切，生成有活性的caspase-3。ZD55-shMYCN能有效的抑制食道肿瘤细胞TE10的细胞生长，促进细胞凋亡。针对P53突变和MYCN基因扩增的晚期食道肿瘤，ZD55-shMYCN提供了新的治疗策略，有希望应用于未来的临床治疗。
关键词：MYCN基因;;溶瘤腺病毒;;p53;;食道肿瘤
