来源：期刊VIP网 时间：
作者：郑岚菱;黄晓霞;杜珊珊;李川;王芹;田芳桢;顾天梦;王世文;谢春;李建东;
单位：贵州医科大学公共卫生与健康学院环境污染与疾病监控教育部重点实验室;传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室国家卫生健康委员会生物安全重点实验室医学病毒和病毒病重点实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所;
摘要：∶为建立发热伴血小板减少综合征病毒（Severe fever with thrombocytopenia syndrome virus, SFTSV）抗原检测方法，本研究基于SFTSV核衣壳蛋白（Nucleocapsid protein, NP）抗原表位分布特征分析，通过大肠杆菌原核表达系统对NP蛋白进行分段重组表达，制备了完整的NP(1～256 aa)、NP氨基端（1～151 aa）和NP蛋白羧基端（149～256 aa）三种蛋白。经Western blot验证重组蛋白免疫原性，免疫新西兰兔制备多克隆抗血清，采用间接ELISA和间接免疫荧光（Immunofluorescence assay, IFA）进行评估和结合活性定量分析，对捕获抗体与酶标抗体最佳组合等反应条件进行优化，比较优化样本处置方式，建立双抗体夹心ELISA检测病毒抗原的方法。以定量的热灭活病毒和重组NP蛋白为参考品绘制标准曲线，评价方法的灵敏性，确定检测限，并通过与qRT-PCR检测确诊SFTS患者血清30份、核酸检测阴性健康体检者血清30份、灭活汉坦病毒和登革病毒各5份、肾综合征出血热患者血清10份，评估方法的其敏感性、特异性和重复性。结果显示，本研究建立的夹心ELISA检测方法对NP蛋白和SFTSV病毒液的最低检出限分别为0.13 pg/μL,17 PFU/100μL，与登革病毒、汉坦病毒不发生交叉反应，批间、批内变异系数均小于5%，样本处理温度和非离子型去污剂的添加是影响抗原检测灵敏度的一个重要因素。综上，本研究建立的双抗体夹心ELISA抗原检测方法具有良好的特异性、灵敏度和重复性，为SFTSV感染的早期临床诊断和现场流行病学调查提供了一种可靠、高效的检测工具。
关键词：发热伴血小板减少综合征病毒;;多克隆抗体;;双抗体夹心ELISA;;抗原检测
基金资助：北京市科技计划项目（项目号∶Z221100007422076）,题目∶北京地区呼吸道传染病病原普分析及标准化可组网检测平台应用可行性研究~~
