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作者：叶家美;穆颖;张媛;张晶晶;周梦棋;史莉圆;姜怀玉;毕一鸣;邢薿文;朱远茂;赵东明;倪建强;顾小雪;翟新验;李琦;王传彬;刘玉良;
单位：福建农林大学动物科学学院;中国动物疫病预防控制中心;内蒙古农业大学兽医学院;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所;
摘要：针对我国目前缺乏基因Ⅱ型非洲猪瘟病毒（African swine fever virus, ASFV）变异株EP402R基因（编码CD2v蛋白）核酸标准物质现状，本研究研制了含不同拷贝数浓度的基因Ⅱ型ASFV变异株EP402R基因强阳性、阳性和弱阳性质粒标准物质。通过分子生物学技术构建基因Ⅱ型ASFV变异株EP402R基因质粒，制备含不同拷贝数浓度的质粒标准物质。采用芯片式数字PCR(cdPCR)进行精确定值，并对其进行纯净性、特异性、均匀性及稳定性等检验和质量评估，确保其满足实际应用要求。结果表明，所研制的标准物质核酸分子拷贝数浓度分别为3.31×10~4拷贝/μL、3.14×10~3拷贝/μL和1.77×10~2拷贝/μL，该标准物质纯净、均匀、特异、稳定；在-20℃、4℃、25℃和37℃条件下，该标准物质可分别稳定保存至少12个月、4个月、14d和9d；经10次反复冻融后仍稳定；将该标准物质模拟运输至广州、上海和新疆后，稳定性未发生变化；基质效应和检测方法互通性评估结果显示，该标准物质在cdPCR与荧光定量PCR(qPCR)检测方法间表现出较好的一致性，在试用上与临床样本间具有良好的互通性。合作定值和试用结果显示，所制备的标准物质量值准确。综上所述，本研究所研制的标准物质具有良好的纯净性、均匀性和稳定性，定量精确，适用于不同场景下基因Ⅱ型ASFV变异株核酸检测，为ASFV变异株早期诊断和防控等提供可靠技术支撑，助力提升我国ASF诊断和防控技术水平。
关键词：非洲猪瘟病毒;;基因Ⅱ型;;变异株;;EP402R基因;;标准物质;;稳定性
基金资助：国家重点研发计划（课题编号：2024YFD1800305）,题目：畜禽重要疫病诊断试剂产品质量评价体系的建立和推广应用;; 中国动物疫病预防控制中心“主业主责”自选课题（课题编号：CADC2022313）,题目：基因Ⅱ型非洲猪瘟病毒变异株EP402R基因质粒标准物质研制与初步试用~~
