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作者：孙赫;李晨曦;肖灵奕;李昌;万家余;冯秀丽;
单位：南京农业大学动物医学院农业农村部细菌学重点实验室;中国农业科学院长春兽医研究所病原微生物生物安全全国重点实验室;
摘要：为了建立一种能够检测猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）的新型等温扩增检测技术，本研究首先通过NUPACK核酸软件设计了一套捕获探针，能够特异性的与PEDV-N基因快速结合，形成三元复合物。在T7 RNA聚合酶的作用下短时间内快速生成大量芒果适配体，与TO1-3PEG-Biotin特异性融合并发出强烈荧光，我们将此系统命名为SP T7(M)。通过对T7 RVA聚合酶、探针浓度、反应时间、反应温度等最适反应条件进行摸索，形成了SP T7(M)检测PEDV的最佳反应条件。结果显示，该方法的检测限（Limit of detection,LOD）为30拷贝/μL，与其他类型的冠状病毒或流感病毒无交叉反应，特异性良好的同时也简化了操作难度与操作步骤。在30份实际样品中表现出与qPCR相同的准确率，本方案的建立为PEDV的检测提供了新的思路，并且为进一步开发兽用检测试剂盒奠定了基础。
关键词：猪流行性腹泻病毒;;T7 RNA聚合酶;;等温扩增;;芒果适配体
基金资助：吉林省科技发展计划项目：（项目号：20230203143SF）,题目：食源性病原菌便携式电化学检测技术及试剂盒研发;; 吉林省杰出青年科技人才项目（项目号：20240602007RC）,题目：乳酸杆菌及其制剂抗PEDV感染的作用与机制研究~~
