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作者：占彦雯;胡丽霞;徐伟鸿;谢昌营;曾娟;吴娜;
单位：江西中医药大学研究生院;江西中医药大学中医学院;江西中医药大学临床医学院;江西中医药大学附属医院;
摘要：目的 基于Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(kelch-like ECH-associated protein 1,Keap1)/核因子-红细胞2相关因子2(nuclear factor-erythroid 2 related factor 2,Nrf2)通路探讨黄芩汤(huangqin decoction, HQD)对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis, UC)铁死亡的影响。方法 体内实验分正常组、模型组、黄芩汤组(HQD)及美沙拉嗪组，葡聚糖酸钠(dextran sulfate sodium, DSS)诱导小鼠实验性溃疡性结肠炎。HE染色观察结肠组织病理情况，检测结肠组织铁含量，实时荧光定量PCR(quantitative polymerase chain reaction, q-PCR)检测谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)、环氧合酶2(prostaglandin-endoperoxide synthase 2,PTGS2)、Nrf2、Keap1及血红素氧化酶1(heme oxygenase, HO-1)的信使核糖核酸(messenger RNA,mRNA)表达水平。体外实验分正常组、模型组、黄芩汤组及抑制剂组(ML385),以Erastin构建细胞铁死亡模型。CCK-8法检测细胞生长情况，检测细胞铁和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)含量，q-PCR检测GPX4、PTGS2、Nrf2、Keap1及HO-1 mRNA表达水平，蛋白免疫印迹(Western Blot, WB)检测GPX4、PTGS2、Nrf2、Keap1及HO-1的蛋白表达水平。结果 体内实验中，与模型组相比，黄芩汤组与美沙拉嗪组在改善结肠损伤方面效果较好。与模型组相比，黄芩汤组及美沙拉嗪组铁含量明显降低。与模型组相比，黄芩汤组和美沙拉嗪组中的PTGS2、Nrf2、Keap1及HO-1的mRNA表达水平均有下降，GPX4的mRNA表达水平上升。体外实验中，与模型组相比，黄芩汤组及抑制剂组的细胞活力明显上升，铁和LDH含量明显下降，PTGS2、HO-1、Nrf2、Keap1的mRNA表达水平明显下降，GPX4的mRNA的表达水平明显上升，PTGS2、Nrf2、Keap1、HO-1的蛋白表达明显下降，GPX4的蛋白表达水平明显上升。结论 黄芩汤抑制溃疡性结肠炎铁死亡的机制可能是调控Keap1/Nrf2通路从而减轻细胞铁死亡。
关键词：溃疡性结肠炎;;黄芩汤;;铁死亡;;Keap1/Nrf2通路;;体内外实验
基金资助：国家自然科学基金项目(82160903);; 江西省中医药管理局科技计划重点项目(2022Z005)
