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作者：藏雨轩;邢雁霞;李艳花;宋国斌;席国萍;白云峰;
单位：山西大同大学医学院;山西大同大学化学生物传感山西省重点实验室;山西大同大学呼吸病与职业病研究所;山西大同大学老年慢性病智慧医康养大同市重点实验室;
摘要：目的 通过结合重组酶聚合酶等温扩增技术(RPA)和侧流层析试纸条(LFD)技术，建立一种简单快速、灵敏度高且特异性强的肺炎克雷伯菌可视化检测方法。方法 针对肺炎克雷伯菌的khe基因设计用于RPA反应的特异性引物，优化RPA扩增的反应温度和反应时间，根据显色结果确定LFD的最佳实验条件，评估RPA-LFD检测肺炎克雷伯菌的灵敏度、稳定性、特异性和临床实用性。结果 RPA在34℃扩增肺炎克雷伯菌10 min即可获得最佳检测结果；以Milipore HF 135s为硝酸纤维素膜，含吐温-20的磷酸盐缓冲液(PBST)为样品展开液，链霉亲和素和二抗浓度分别为0.8 mg/ml和0.1 mg/ml时，LFD条带显色效果最佳；RPA-LFD检测肺炎克雷伯菌检测限为5 CFU/ml,在六组平行实验中条带显色强度的相对标准偏差低于5%,且与其他菌株无交叉反应。此外，RPA-LFD检测肺炎克雷伯菌的灵敏度不受血清中蛋白质、脂质等成分影响。结论 本研究建立的RPA-LFD快速检测肺炎克雷伯菌方法具有操作简便、灵敏性高、特异性强等特性，且不需要复杂设备，同时对操作人员技术要求不高，为肺炎克雷伯菌的早期诊断和流行病学调查提供新技术。
关键词：肺炎克雷伯菌;;重组酶聚合酶等温扩增;;侧流层析试纸条;;快速检测
基金资助：山西省基础研究计划(202403021212219);; 山西省高等学校科技创新计划(2024L316)
