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作者：鲁莎;谭从娥;
单位：陕西中医药大学基础医学院;
摘要：目的 探讨右归丸含药血清对过氧化氢(H_2O_2)诱导衰老细胞线粒体能量代谢的影响。方法 原代培养大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E),并将细胞分为(1)空白组、模型组、空白血清组、含药血清组；(2)miR-125b-1-3p-mimic-NC组、miR-125b-1-3p-mimic组、miR-125b-1-3p-inhibitor-NC组、miR-125b-1-3p-inhibitor组；(3)空白血清组、含药血清+miR-125b-1-3p-NC组、含药血清+miR-125b-1-3p-mimic组、含药血清+miR-125b-1-3p-inhibitor组，采用双荧光素酶报告基因实验确定miR-125b-1-3p对UQCRB的靶向调控关系。然后采用H_2O_2诱导大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)发生衰老，并给予右归丸含药血清干预，通过β-半乳糖苷酶染色法检验细胞发生衰老情况，Western blot法检测衰老相关蛋白(P16、P21)表达，以此确证细胞发生衰老。进而采用脂质体转染技术，转染miR-125b-1-3p-mimic/nhibitor进入细胞，再用qPCR法检测细胞miR-125b-1-3p、UQCRB mRNA表达及线粒体DNA拷贝数(mtDNA)变化，透射电镜观察肾脏线粒体超微结构，JC-1荧光探针法检测线粒体膜电位，DCFH-DA法检测细胞内活性氧(ROS)水平，试剂盒检测线粒体三磷酸腺苷(ATP)水平。结果 双荧光素酶报告基因实验证实UQCRB是miR-125b-1-3p的直接作用靶点。与空白组比较，模型组β-半乳糖苷酶染色阳性细胞率升高和衰老相关蛋白(P16和P21)表达升高，检测结果均确认H_2O_2诱导衰老细胞模型成功。与空白组比较，模型组ROS水平升高(P<0.01),线粒体膜电位、mtDNA、ATP水平和UQCRB表达均降低(P<0.05,P<0.01);与模型组比较，右归丸含药血清组ROS水平降低(P<0.01),线粒体膜电位、mtDNA、ATP水平和UQCRB表达均升高(P<0.05,P<0.01)。与miR-125b-1-3p-mimic-NC组比较，miR-125b-1-3p-mimic组线粒体ATP、mtDNA、线粒体膜电位水平降低(P<0.05,P<0.01),ROS水平升高(P<0.01);与miR-125b-1-3p-inhibitor-NC组比较，miR-125b-1-3p-inhibitor组线粒体ATP、mtDNA、线粒体膜电位水平升高(P<0.05,P<0.01),ROS水平降低(P<0.01)。结论 右归丸可改善衰老细胞的线粒体能量代谢水平，其作用机制可能与抑制miR-125b-1-3p表达从而上调UQCRB表达量有关。
关键词：右归丸;;细胞衰老;;miR-125b-1-3p;;UQCRB;;线粒体能量代谢
基金资助：国家自然科学基金项目(81973754);; 陕西省科技厅自然科学基础研究计划(2025JC-YBMS-892)
