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作者：曾繁文;王明明;朱雪丹;李莉;卫恒习;张守全;
单位：广州动物园,广州市野生动物研究中心;华南农业大学动物科学学院;
摘要：本研究旨在制备公猪精子顶体蛋白4(Sperm Acrosome Associated 4,SPACA4)的多克隆抗体（Polyclonal antibody,PAb），以期为揭示猪SPACA4蛋白参与精子受精过程的分子机制提供试验材料。从GeneBank上选取公猪SPACA4基因序列（登录号：NM＿001177929.1）编码区，去掉信号肽与终止子，克隆至pET-SUMO表达载体并转化E.coli Rosstta(DE3)感受态细胞，经1 mol/L IPTG诱导表达及亲和层析纯化后获得重组SPACA4蛋白。将重组蛋白免疫小鼠制备SPACA4 PAb，使用间接ELISA检测抗体效价，并利用WesternBlot法验证SPACA4PAb对公猪精子天然蛋白的特异性。重组质粒pET-SUMO-SPACA4能被IPTG诱导表达，主要以包涵体形式存在，SUMO-SPACA4重组蛋白相对分子质量约为25 KDa，鼠源SPACA4PAb能特异性结合重组蛋白，最高效价为1:2048000。经WesternBlot法检测，SPACA4PAb能识别天然SPACA4蛋白。本研究利用原核表达系统成功制备出效价高、特异性好的公猪SPACA4PAb，并能应用于识别天然SPACA4蛋白，为SPACA4基因的功能和应用研究提供素材。
关键词：公猪;精子顶体蛋白4(SPACA4);原核表达;多克隆抗体
基金资助：广东省现代农业产业体系生猪创新团队（2022KJ126）
