来源：期刊VIP网 时间：
作者：李双;杨泽敏;廖义潇;杨颖;
单位：贵州大学动物科学学院;贵州大学动物疫病研究所;
摘要：试验旨在分析大肠杆菌Nissle 1917鞭毛蛋白FliC (FliCEcN)的结构特征及其对Caco-2细胞的刺激作用。试验通过大肠杆菌BL21 (DE3)表达FliCEcN蛋白、经NTA柱纯化FliCEcN蛋白并通过SDS-PAGE和Westernblot验证，利用SOPMA和Alphofold2预测FliCEcN蛋白的结构模型、表面增强拉曼光谱和圆二色谱解析FliCEcN蛋白的结构，使用FliCEcN蛋白刺激Caco-2细胞后，检测免疫相关因子的分泌水平。结果显示，FliCEcN蛋白的大小为64 kDa，能够被抗His单克隆抗体特异识别；FliCEcN蛋白的氨基和羧基末端主要由α-螺旋组成，中间结构域主要由β-折叠组成。FliCEcN蛋白酰胺Ⅰ区最大吸收峰均位于1 656 cm-1处，主要二级结构为α-螺旋和β-折叠；FliCEcN的α-螺旋占比44.4%,β-折叠占比23.4%,β-转角占比13.5%，无规则卷曲占比19.0%;FliCEcN蛋白能够有效刺激Caco-2细胞分泌白细胞介素-6 (IL-6)、肿瘤坏死因子-α (TNF-α)和白细胞介素-10 (IL-10)；随着刺激时间延长，IL-6的分泌水平呈下降趋势，IL-10和TNF-α的分泌水平呈增加趋势。研究表明，α-螺旋和β-折叠是构成FliC_(EcN)的主要结构，可促进其构象的正确折叠和维持其三维结构稳定，FliC_(EcN)蛋白刺激Caco-2细胞分泌IL-6、IL-10、TNF-α的水平存在差异。
关键词：大肠杆菌Nissle 1917;;鞭毛蛋白;;表面增强拉曼光谱;;圆二色谱;;生物学活性
基金资助：2023年度贵州省基础研究计划项目（项目编号：黔科合基础-ZK[2023]一般105）
