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作者：刘雅鑫;刘健;李祯;曹占鸿;白浩楠;安昱;房星宇;杨擎;李辉;李娜;
单位：长春中医药大学吉林省人参科学研究院中药分子药理实验室;吉林省前卫医院肛肠科;
摘要：目的：基于网络药理学探讨王浆酸（10-HDA）对人结肠癌SW620细胞增殖和迁移的影响，阐明其相关分子机制。方法：利用中药系统药理学（TMSCP）数据库和中医药综合数据库（TCMID）以关键词“蜂王浆”进行检索得到10-HDA等活性成分及对应靶点，采用Swiss Target Prediction数据库预测小分子靶点。采用Gene Cards数据库和在线人类孟德尔遗传（OMIM）数据库以关键词“Colon Cancer”获得靶点，利用String数据库和Cytoscape 3.8. 0软件构建蛋白-蛋白互作（PPI）网络，筛选核心靶点；利用Metascape数据库对基因本体（GO）功能富集和京都基因与基因组百科全书（KEGG）信号通路进行富集分析，筛选特有成分10-HDA进行体外活性实验。将生长状态良好的人结肠癌SW620细胞分为对照组和不同剂量（1、5、10、15和20 mmol·L~(-1)） 10-HDA组，采用MTT法检测各组细胞活性并计算细胞存活率。SW620细胞分为对照组、低剂量（5 mmol·L~(-1)）10-HDA组、中剂量（10mmol·L~(-1)）10-HDA组和高剂量（15mmol·L~(-1)）10-HDA组，Hoechst33342染色法观察各组细胞形态表现，细胞划痕实验检测各组细胞划痕愈合率，流式细胞术检测各组不同细胞周期细胞百分率，生化法检测各组细胞中总抗氧化能力（T-AOC）和超氧化物歧化酶（SOD）活性，Western blotting法检测各组细胞中B细胞淋巴瘤2 (Bcl-2)、 Bcl-2相关X蛋白（Bax）、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3 (Caspase-3)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(Caspase-9)、糖原合成酶激酶3β (GSK3β)、β-连环蛋白（β-catenin）和细胞周期蛋白D1 (Cyclin D1)蛋白表达水平。结果：TCMSP数据库筛选得到蜂王浆6种活性成分，10-HDA治疗结肠癌核心靶点28个。GO功能富集分析主要涉及细胞增殖和细胞凋亡等信号通路；KEGG信号通路富集分析涉及细胞周期、前列腺癌、细胞衰老和p53等信号通路，GSK3β/β-catenin信号通路与细胞周期有密切关联。与对照组比较，5、10、15和20 mmol·L~(-1) 10-HDA组细胞存活率呈剂量依赖性降低（P<0.05或P<0.01）。与对照组比较，不同剂量10-HDA组细胞中凋亡细胞数明显增多，细胞划痕愈合率明显降低（P<0.05或P<0.01），中和高剂量10-HDA组细胞中S期细胞百分率明显升高（P<0.05或P<0.01），不同剂量10-HDA组细胞中T-AOC和SOD活性明显降低（P<0.05或P<0.01）。与对照组比较，低剂量10-HDA组细胞中Bcl-2蛋白表达水平明显降低（P<0.01）,GSK3β蛋白表达水平明显升高（P<0.05）；与对照组比较，中和高剂量10-HDA组细胞中Bax、 Caspase-3、 Caspase-9和GSK3β蛋白表达水平明显升高（P<0.05或P<0.01）,Bcl-2、β-catenin和Cyclin D1蛋白表达水平明显降低（P<0.01）。结论：10-HDA可明显抑制结肠癌细胞增殖和迁移，并可促进结肠癌细胞的凋亡和氧化水平，其作用机制可能与激活GSK3β/β-catenin信号通路有关。
关键词：王浆酸;;结肠肿瘤;;SW620细胞;;细胞凋亡;;糖原合成酶激酶3β;;β-连环蛋白
基金资助：吉林省卫健委科技能力提升项目（2022JC009）
