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作者：石禹;窦志华;包小峰;
单位：南通市第三人民医院南通大学附属南通第三医院药学部;南通大学药学院;
摘要：目的 研究衣原体基因转录调控过程中基因通用调节因子A(GrgA)与RNA聚合酶(RNAP)α亚基相互作用的关系，以提高GrgA和RNAP参与衣原体转录和调控机制的认识。方法 本研究通过引物设计，采用聚合酶链反应(PCR),构建携带His或Strep蛋白标签的衣原体RNA聚合酶(cRNAP)α亚基和GrgA的各种融合蛋白表达载体，将表达载体转入ArcticExpress表达菌株的化学感受态细胞菌株，通过异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导13℃低温表达相应蛋白，借助体外蛋白牵出试验(Pull-down技术)、聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及蛋白质印迹法(WB)分析鉴定出GrgA与cRNAP α亚基两者间相互结合的较为详细的某一段氨基酸序列。结果 cRNAP α亚基能与GrgA结合，GrgA与α△(277-377)有结合，与α△(1-259)无结合；α亚基与GrgA△(1-64)、GrgA△(65-112)、GrgA△(114-165)、GrgA△(166-206)、GrgA△(207-268)均有结合。结论 GrgA能与cRNAP α亚基结合；cRNAP α亚基与GrgA的结合位点位于α亚基N末端的1-259位氨基酸序列；GrgA通过多个氨基酸序列位点与cRNAP α亚基结合；cRNAP α亚基的N末端可能同样参与了转录调控过程。
关键词：衣原体;;基因通用调节因子A;;衣原体RNA聚合酶;;亚基;;融合蛋白;;牵出试验;;相互作用
基金资助：国家自然科学基金资助项目(31370209);; 江苏省高等学校基础科学(自然科学)研究重大项目(23KJA310004);; 南通市基础科学研究计划项目(JC22022043);; 南通市卫生健康委员会面上指令课题(MS2022064)
