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作者:宋艳丽;崔天薇;任杏杏;石少琦;万彦荣;张超男;王会娟;卫爱武;
单位:河南中医药大学第一附属医院生殖医学科;河南中医药大学第一临床医学院;
摘要:目的 探索补肾活血方-丹寿汤对抗心磷脂抗体(aCL)诱导滋养细胞损伤的保护作用及对嘌呤能离子通道型7(P2X7)介导的Nod样受体蛋白3(NLRP3)通路的影响。方法 建立aCL诱导滋养细胞损伤模型,通过CCK-8检测各组细胞活力,计算滋养细胞模型的最佳aCL-IgG剂量,分别给予高、中、低浓度丹寿汤含药血清治疗,探索丹寿汤含药血清合适的治疗剂量,选择高浓度丹寿汤含药血清为最佳干预剂量,分别给予丹寿汤含药血清、P2X7受体拮抗剂(BBG)处理aCL诱导的模型细胞,TUNEL染色法检测各组细胞凋亡情况,酶联免疫吸附试验检测细胞中白细胞介素(IL)-1β、IL-18含量,免疫印迹法(WB)检测cleaved caspase-1、ASC、NLRP3、Bcl2、Bax、cleaved caspase-3、P2X7蛋白的表达。结果 与Control组比较,aCL组细胞凋亡数目,细胞中IL-1β(59.08±9.42)ng/ml、IL-18(621.65±103.51)ng/ml, cleaved caspase-1、ASC、NLRP3、Bax、cleaved caspase-3、P2X7蛋白表达明显增加(均P<0.05),Bcl2蛋白水平明显降低(P<0.05);与aCL组比较,aCL+BBG组细胞中IL-1β(20.63±2.84)ng/ml、IL-18(263.71±47.55)ng/ml, cleaved caspase-1、ASC、NLRP3、Bax、cleaved caspase-3、P2X7蛋白表达明显降低(均P<0.05),Bcl2蛋白水平明显增加(P<0.05); aCL+丹寿汤组细胞存活率提高(P<0.05),细胞凋亡数目,细胞中IL-1β(33.04±3.71)ng/ml、IL-18(352.03±66.23)ng/ml, cleaved caspase-1、ASC、NLRP3、Bax、cleaved caspase-3、P2X7蛋白表达明显降低(P<0.05),Bcl2蛋白水平明显增加(P<0.05)。结论 丹寿汤能抑制血小板活化,下调P2X7的表达,抑制NLRP3的激活,抑制滋养细胞的损伤,可能为减少流产的发生提供理论依据。
关键词:补肾活血方;;丹寿汤;;抗心磷脂抗体;;嘌呤能离子通道型7;;Nod样受体蛋白3
基金资助:国家自然科学基金(82104911);; 河南中医药大学第一附属医院博士科研基金(KY-B0367-20);; 中国博士后科学基金第四批特别资助(站前)(2022TQ0099);中国博士后科学基金第72批面上资助二等(2022M721064)