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作者：殷美琦;宋秀道;
单位：南京中医药大学附属苏州市中医医院;
摘要：探讨半夏泻心汤体内外保护糖尿病前期胰岛β细胞功能及对G蛋白偶联受体激酶2(G protein-coupled receptor kinase 2,GRK2)/甜味受体(sweet taste receptor, STR)信号通路的影响，为临床应用半夏泻心汤防治糖尿病前期提供参考。方法 应用60%高脂饲料诱导制备肥胖糖尿病前期小鼠模型，将小鼠随机分为正常对照组、模型组和半夏泻心汤组，连续给药治疗4周后，检测各组小鼠口服葡萄糖耐量(oral glucose tolerance test, OGTT)各时间点血糖、空腹胰岛素水平，石蜡切片苏木素-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色镜下观察小鼠胰腺组织胰岛形态，免疫荧光共定位染色检测胰腺组织β/α细胞数量，免疫组化检测胰腺组织甜味受体亚基味觉1受体成员3(taste 1 receptor member 3,TAS1R3)表达，免疫荧光双染色法检测GRK2表达，并进行GRK2和胰岛素(insulin)共定位分析；蛋白免疫印迹(Western blot, WB)和实时定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)法分别检测胰腺组织甜味受体亚基TAS1R3和GRK2蛋白和mRNA表达；运用胰岛β细胞株INS-1,半夏泻心汤含药血清干预高糖(25 mmol/L)处理的细胞24 h,酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测低糖和高糖刺激下胰岛素分泌，WB检测细胞TAS1R3和GRK2蛋白表达。结果 与模型组相比，半夏泻心汤组减重效果明显(P<0.001);与正常对照组比较，模型组小鼠OGTT各时间点血糖及血糖曲线下面积、空腹胰岛素水平均显著升高(P<0.01);胰岛体积明显增大，胰岛中β/α比例明显降低；甜味受体表达显著下调，GRK2表达显著上调。半夏泻心汤给药治疗后小鼠OGTT各时间点血糖及血糖曲线下面积、空腹胰岛素水平均显著下降(P<0.01);胰岛形态和结构较规整，胰岛体积明显减小，胰岛细胞数量接近正常胰岛；半夏泻心汤干预恢复了甜味受体表达，并下调GRK2的表达。体外实验亦显示，半夏泻心汤可以恢复高糖诱导的INS-1 β细胞胰岛素分泌紊乱，上调甜味受体的表达，下调GRK2的表达。结论 半夏泻心汤可以有效调节血糖，保护胰岛β细胞功能，治疗糖尿病前期，作用机制可能与其调控β细胞甜味受体信号通路有关。
关键词：半夏泻心汤;;糖尿病前期;;β细胞功能;;甜味受体;;GRK2
基金资助：国家自然科学基金项目(82004315,82305088);; 苏州市姑苏卫生人才计划人才科研项目(GSWS2021048);; 苏州市科技发展计划(基础研究-医学应用基础研究)项目(SKY2023218);苏州市科技发展计划(医疗卫生科技创新)项目(SKY2022204)
