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作者：常博雅;任佳;金旭;郝健亨;高珍;张艳林;曹玉霞;王海军;
单位：山西中医药大学第二临床学院;山西省针灸医院;
摘要：目的 通过观察“秩边透水道”针法对卵巢低反应(poor ovarian response, POR)小鼠卵巢组织内质网凋亡(endoplasmic reticulum stress, ERS)途径关键蛋白的影响，探讨针刺改善POR小鼠卵巢功能的可能机制。方法 根据随机数字表法选出动情周期正常的45只小鼠，分为空白组、模型组和针刺组(n=15);空白组采用0.9%氯化钠溶液等体积灌胃，模型组和针刺组采用雷公藤混悬液灌胃(50 mg·kg~(-1)·d~(-1)),连续14 d以制备POR小鼠模型，造模完成后，针刺组选取“秩边透水道”针法进行干预治疗，每日1次，每次20 min,连续治疗14 d后进行促排，次日完成取材。阴道涂片法观测小鼠动情周期变化；比较各组小鼠卵巢指数；ELISA法检测小鼠血清中促卵泡生成素(follicle-stimulating hormone, FSH)、促黄体生成激素(luteinizing hormone, LH)、雌二醇(estradiol, E2)、抗缪勒管激素(anti-mullerian hormone, AMH)含量；HE染色法检测卵巢组织病理形态；透射电镜检测卵巢组织超微结构；TUNEL染色法检测卵巢组织阳性细胞凋亡率；免疫组化法检测卵巢组织葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)阳性表达；荧光定量PCR法和Western blot法测蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase R-like endoplasmic reticulum kinase, PERK)、真核细胞起始因子2α(eukaryotic initiation factor 2α,eIF2α)、活化转录因子4(the activating transcription factor 4,ATF4)、C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(C/EBP homologous protein, CHOP)、半胱氨酸蛋白酶(cysteine-aspartic acid protease, Caspase)-3 mRNA和蛋白表达变化。结果 与空白组相比，模型组小鼠动情周期紊乱率升高(P<0.01);取卵数、卵巢湿重和卵巢指数不同程度降低(P<0.01);血清中FSH、LH表达量升高(P<0.01),E2、AMH表达量下降(P<0.01);卵巢组织形态破坏，闭锁卵泡增多；电镜下卵泡变形，线粒体肿胀皱缩，线粒体嵴消失；卵巢细胞凋亡面积增高(P<0.01);卵巢GRP78阳性表达增加(P<0.01);卵巢组织PERK、eIF2α、ATF4、CHOP、Caspase-3 mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.01)。与模型组比较，针刺组小鼠动情周期紊乱率降低(P<0.01);获卵数、卵巢湿重、卵巢指数升高(P<0.01,P<0.05);血清中FSH、LH表达量下降(P<0.01),AMH、E2表达量提高(P<0.01,P<0.05);卵巢组织形态改善，闭锁卵泡减少；电镜下卵泡内线粒体增多，结构、形状及排列均有不同程度改善；卵巢细胞凋亡面积减少(P<0.01);卵巢GRP78阳性表达下降(P<0.01);卵巢组织PERK、eIF2α、ATF4、CHOP、Caspase-3 mRNA和蛋白表达水平均有不同程度下降(P<0.01,P<0.05)。结论 “秩边透水道”针法可以改善POR小鼠的卵巢功能，降低卵巢颗粒细胞凋亡，其机制可能与调控内质网凋亡通路上的关键因子相关。
关键词：卵巢低反应;;“秩边透水道”针法;;内质网;;凋亡
基金资助：国家自然科学基金面上项目(82074549);; 山西省教育厅项目(2023L187);; 山西中医药大学博士科研启动基金项目(2023BK17)
