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作者：甘佩婷;吕祥威;徐彤彤;覃秋语;凌煜雅;李水溶;
单位：广西壮族自治区桂林医学院附属医院综合科医疗保健病区;桂林医学院广西肿瘤免疫与微环境调控重点实验室;
摘要：目的 探究微小RNA-144-5p(microRNA-144-5p,miR-144-5p)靶向细胞自噬相关蛋白5(autophagy-related protein 5,Atg5)对大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用机制及其与细胞自噬的关系。方法 选择雄性SD大鼠24只，随机分为假手术组、模型组、空白转染组和低表达组，每组6只。术前14 d，低表达组注射腺相关病毒（adeno-associated virus,AAV）-miR-144-5p拮抗剂（5×10~(11) vg），空白转染组注射AAV-空白转染对照载体。采用冠状动脉左前降支结扎术建立大鼠缺血再灌注损伤模型。假手术组仅在左前降支下方穿线而不结扎，其余各组进行缺血30 min、再灌注2 h处理。采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色法检测心脏缺血区域面积；采用苏木精-伊红染色观察心肌组织病理形态变化。Western blot检测心肌细胞中微观相关蛋白轻链3(microtubule-associated protein light chain 3,LC3)-B、Atg5和自噬降解底物P62表达。采用双荧光素酶报告基因试验检测miR-144-5p与Atg5的结合作用。结果 与假手术组比较，模型组心肌组织miR-144-5p表达明显升高，差异有统计学意义（2.91±0.12 vs 0.93±0.04,P<0.05)。与假手术组比较，模型组心肌损伤程度、心肌梗死面积、P62表达明显升高，Atg5和LC3-B表达明显降低，差异有统计学意义（P<0.05）；与空白转染组比较,低表达组心肌损伤程度、心肌梗死面积、P62表达明显降低，Atg5和LC3-B表达明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)。双荧光酶素实验显示，Atg5存在与miR-144-5p互补结合的靶位点。结论 miR-144-5p可靶向Atg5调控心肌自噬从而减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤。
关键词：心肌缺血;;心肌再灌注损伤;;微RNAs;;自噬相关蛋白5
基金资助：国家自然科学基金项目(82260864);; 广西自然科学基金项目(2025GXNSFAA069850)
