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作者：刘继东;张家豪;王建波;曲怡;薛亚楠;
单位：辽宁中医药大学;辽宁中医药大学中医脏象理论及应用教育部重点实验室;
摘要：目的 从长链非编码RNA尿路上皮癌相关基因1(LncRNA-UCA1)探讨针刺调节miRNA-331-3p/溴结构域蛋白4(BRD4)轴改善脾虚大鼠肠道炎症作用机制，探讨“健益脾气”针刺疗法改善脾虚便溏症状现代作用机制。方法 将60只SD雄性大鼠以随机数字表法分为正常组、模型组、非经非穴组、针刺组，每组15只。除正常组外，其余3组采用劳倦过度和不规律饮食复合方法建立脾虚证大鼠模型。造模成功后，针刺组电针“足三里”穴及“脾俞”穴干预治疗，非经非穴组给予电针尾尖作为对照干预，每日1次/20 min,共治疗14 d。治疗结束后，取大鼠血清及结肠组织。qPCR法检测大鼠结肠组织LncRNA-UCA1、miRNA-331-3p/BRD4轴相关基因的表达；ELISA法检测大鼠血清中白介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)的含量；HE染色法观察大鼠结肠组织病理形态变化；免疫组化法观察结肠中BRD4、白细胞介素-8(IL-8)的表达情况；免疫荧光法观察IL-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及核因子-κBp65(NFκBp65)的表达水平；TUNEL染色法观察各组结肠组织凋亡情况。结果 与正常组比较，模型组、非经非穴组大鼠结肠组织miRNA-331-3p的表达水平明显下降(P<0.05),LncRNA-UCA1、BRD4、NF-κB p65、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α的mRNA表达水平有所升高(P<0.05);与模型组比较，针刺组大鼠结肠组织miRNA-331-3p的表达水平明显升高(P<0.05),LncRNA-UCA1、BRD4、NF-κB p65、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α的mRNA表达水平有所降低(P<0.05)。与正常组比较，模型组大鼠血清中促炎因子IL-1β、IL-6表达水平明显升高(P<0.05),与模型组比较，针刺组大鼠结肠组织中促炎因子IL-1β、IL-6的表达水平有所降低(P<0.05)。免疫组化法结果显示与正常组比较，模型组大鼠结肠组织BRD4、IL-8表达有所升高(P<0.05);与模型组比较，针刺组的BRD4表达有所降低(P<0.05)。免疫荧光结果显示与正常组比较，模型组、非经非穴组结肠组织IL-1β、IL-6、TNF-α、NF-κB p65免疫荧光平均吸光度值升高(P<0.05);与模型组比较，针刺组大鼠结肠组织中IL-1β、IL-6、TNF-α、NF-κB p65免疫荧光平均吸光度值降低(P<0.05)。另外HE染色结果显示，针刺治疗可有效减轻结肠黏膜组织中炎症细胞浸润和杯状细胞的损失；TUNEL染色结果显示，针刺治疗可以改善脾虚大鼠结肠炎症，抑制结肠黏膜细胞凋亡。结论 电针“足三里”“脾俞”穴可以干预LncRNA-UCA1调节miRNA-331-3p/BRD4轴，抑制肠道炎症和促炎症介质的表达，进而抑制结肠黏膜细胞凋亡，提高机体免疫力，从而改善脾虚便溏症状。
关键词：足三里;脾俞;脾虚;肠道炎症;LncRNA-UCA1;miRNA-331/BRD4
基金资助：辽宁省教育厅高等学校基本科研项目(LJKZ0886); 辽宁省科学技术计划项目(2021-MS-248)
