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作者：孟宇豪;萧闵;张玮珩;陈思易;葛春蕾;何欢;江晓翠;吕银娟;
单位：湖北中医药大学基础医学院;湖北中医药大学实验动物中心;湖北时珍实验室;
摘要：目的 研究仙茅苷(Curculigoside, CUR)抗氧化缓解卵巢早衰(Premature ovarian failure, POF)模型小鼠的卵巢颗粒细胞(Granulosa cells, GCs)凋亡的作用机制。方法 将经过适应性喂养后的小鼠，分成空白组、模型组、CUR低剂量组、CUR中剂量组、CUR高剂量组，以及戊酸雌二醇组。利用环磷酰胺(Cyclophosphamide, CTX)腹腔注射复制小鼠模型，造模完成后，连续灌胃治疗14 d并且每日进行阴道涂片，末次给药24 h后称量小鼠体质量并处死小鼠，取血与卵巢组织，称量双侧卵巢组织湿重并计算卵巢指数，测定血清促卵泡激素(Follicle-stimulating hormone, FSH)、抗缪勒管激素(Anti-Müllerian Hormone, AMH)、雌二醇(Estradiol, E_2),卵巢进行苏木精-伊红染色法(Hematoxylin-eosin staining, HE)观察卵泡发育与黄体形态，并使用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(原位末端凋亡法)(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling, TUNEL)测定GCs凋亡水平，检测卵巢组织超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase, SOD)活性、谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione Peroxidase, GSH-Px)含量及丙二醛(Malondialdehyde, MDA)水平，使用蛋白印迹法(Western Blot, WB)检测卵巢蛋白激酶B(Protein kinase B,AKT)、p-AKT、雷帕霉素靶蛋白(Mammalian target of rapamycin, mTOR)、p-mTOR的蛋白表达量。结果 与空白组相比，模型组小鼠动情周期紊乱、卵巢指数下降、见大量闭锁卵泡、GCs出现高水平凋亡、FSH水平明显上调、而AMH和E_2出现明显下降，说明成功复制了POF小鼠模型。与模型组相比，给予CUR后，能够提高抗氧化水平、活化AKT/mTOR信号通路，改善POF小鼠的动情周期、血清激素水平、减少GCs凋亡、促进卵泡发育，从而恢复卵巢储备功能。结论 CUR能改善CTX诱导的小鼠POF,其机制可能与活化AKT/mTOR信号通路发挥抗氧化作用缓解POF模型小鼠GCs凋亡有关。
关键词：卵巢早衰;卵巢储备功能下降;仙茅苷;AKT/mTOR信号通路;颗粒细胞凋亡
基金资助：国家自然科学基金青年科学基金项目(82104704); 湖北省中医药管理局2023—2024年度中医药指导性项目(ZY2023F134)
