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作者：张乙进;安利娟;雷琪;罗红;江滟;
单位：贵州医科大学医学检验学院临床微生物与免疫学教研室;贵州医科大学医学检验学院基础医学院免疫学教研室;贵州医科大学医学检验学院实验动物中心;贵州医科大学附属医院临床检验中心微生物免疫科;
摘要：目的 基于线粒体自噬途径探讨人β防御素-3(HBD3)对感染人支气管上皮细胞(BEAS-2B)的甲型流感病毒(IAV)[A/PR/8/34(H1N1)病毒株]复制的抑制作用。方法 IAV感染BEAS-2B细胞，细胞情况观察：噬斑实验及光学显微镜观察；药物处理：HBD3、自噬激动剂雷帕霉素(Rapa)、自噬抑制剂LY294002;实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)法检测TUFM、MAVS、NP、M2、PB1-F2基因表达水平；Western Blot检测P62、LC3Ⅱ、LC3Ⅰ蛋白表达水平。结果 噬斑形成实验显示，随着病毒滴度增加，空斑形成数目增多。随着病毒滴度增加或感染时间延长，BEAS-2B细胞内TUFM、MAVS、NP、M2、PB1-F2基因表达水平逐渐增加，P62蛋白表达水平减少，LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达水平增加(P<0.05)。IAV感染BEAS-2B细胞48 hpi,镜下IAV组细胞数量明显较IAV+HBD3组少，细胞间隙增大，细胞皱缩明显；IAV+HBD3组较IAV组BEAS-2B细胞内TUFM、MAVS、NP、M2、PB1-F2基因表达水平减少，P62蛋白表达水平增加，LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白水平减少(P<0.05)。TUFM、MAVS、NP、M2、PB1-F2基因表达水平，IAV+Rapa+HBD3组低于IAV+Rapa组(P<0.05); P62的蛋白表达水平，IAV+Rapa+HBD3组高于IAV+Rapa组(P<0.05); LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的蛋白表达水平，IAV+Rapa+HBD3组低于IAV+Rapa组(P<0.05)。结论 随着病毒滴度增加或感染时间延长，IAV在BEAS-2B细胞内增殖增加，细胞损害加重；HBD3能在IAV进入细胞后抑制其复制；HBD3可通过抑制MAVS、TUFM介导的线粒体自噬途径保护宿主细胞，抑制IAV的复制。
关键词：甲型流感病毒;;病毒复制;;线粒体自噬;;人β防御素3
基金资助：国家自然科学基金项目(81260249);; 贵州省科技计划项目(黔科合平台人才[2019]5610)
