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作者：刘泓屹;张伟;蔡建涛;古涛鸣;王良锋;陈治彤;曹伟军;郑海学;杨帆;张桂红;
单位：华南农业大学兽医学院广东省动物源性人兽共患病预防与控制重点实验室;中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室国家口蹄疫参考实验室;甘肃省病原生物学基础学科研究中心;
摘要：本研究旨在探究TRIM7对口蹄疫病毒（FMDV）复制的影响。首先，针对猪源TRIM7基因外显子设计两条单向导RNA(single guide RNA,sgRNA)，分别构建至载体PX459中，将成功构建的sgRNA重组质粒转染PK-15细胞，经嘌呤霉素筛选、有限稀释法挑取单克隆细胞，经测序及Western-blot分析鉴定TRIM7基因的敲除情况，获得敲除TRIM7基因的PK-15细胞系。将TRIM7基因敲除细胞和对照细胞中分别感染FMDV，用Western-blot、RT-qPCR和TCID_(50)测定等方法综合评价敲除TRIM7基因后对FMDV复制的影响。同时，在PK-15细胞上过表达TRIM7检测其对病毒复制的影响。结果显示，成功构建TRIM7基因敲除PK-15细胞系，且FMDV在TRIM7基因敲除细胞系中的复制水平均显著低于在对照细胞中的复制水平，当过表达TRIM7时则会显著促进病毒的复制，表明TRIM7影响了FMDV的复制。本研究为深入探索TRIM7的生物学功能及其调控病毒复制的分子机制奠定了基础。
关键词：CRISPR/Cas9;;TRIM7基因;;细胞系;;过表达;;口蹄疫病毒
基金资助：国家自然科学基金项目(32072831,32102639);; 国家重点研发计划项目(2021YFD1800300);; 甘肃省杰出青年基金项目(21JR7RA026);; 中央高校基本科研业务费专项(lzujbky-2022-ey20);; 甘肃省科技重大专项(22ZD6NA001)
