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作者：宫萱;陈诗雅;杜久斌;陈晓洁;张承凤;黎明;杨延丽;贺笋;
单位：天康制药股份有限公司;
摘要：本试验旨在建立胶体金免疫层析法快速定量猪流行性腹泻病毒（PEDV）N蛋白的方法，评价其用于疫苗质量控制的可行性。通过大肠杆菌重组表达PEDV N蛋白，并进行Ni金属螯合层析纯化，制备N蛋白标准品；优化胶体金免疫层析法检测条件，包括检测体积、裂解温度、裂解时间、反应温度、反应时间；建立N蛋白标准品浓度与胶体金试纸条检测灰度的响应曲线，考察检测限、准确度、精密度、对不同生产阶段PEDV样品的检测适用性和应用于成品疫苗稳定性监测的可行性；比较胶体金免疫层析法定量结果与TCID_(50)测定结果的相关性。结果表明，制备的N蛋白标准品纯度为94.5%；检测最佳条件为将PEDV样品在室温下裂解10 min后，取100μL于胶体金试纸条中，室温反应20 min后检测；在最佳条件下，N蛋白浓度与胶体金试纸条检测灰度的四参数拟合曲线R~2=0.997 27，检测限为7.14 ng/mL，不同浓度的N蛋白标准品回收率为92.2%～111.5%，高、低浓度的PEDV样品6次重复检测RSD<10%，可用于细胞培养液、灭活样、成品疫苗的检测和成品疫苗储存稳定性监测；N蛋白浓度与TCID_(50)结果具有相关性，线性拟合Rs~2=0.975 66,Pearson相关系数为0.987 76。综上所述，胶体金免疫层析法定量PEDV N蛋白检测速度快，具有良好的线性、准确性和重复性，可应用于PEDV样品的快速定量检测和疫苗质量快速评估。
关键词：猪流行性腹泻病毒;;胶体金免疫层析法;;N蛋白;;定量;;疫苗
基金资助：新疆维吾尔自治区“天池英才”青年博士项目
