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作者：戴观丽;周艳龙;武正前;宋大铭;蔡祎平;周玉龙;李丹;郑海学;
单位：黑龙江八一农垦大学动物科技学院;中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室;古浪县农业产业化服务中心;
摘要：首先，通过PCR扩增和同源重组技术构建了pET-28a-H124R重组原核表达质粒。经IPTG诱导，pH124R蛋白在大肠杆菌中高效表达，并通过镍柱亲和层析法纯化获得重组蛋白。随后，用pH124R重组蛋白免疫豚鼠，制备了特异性多克隆抗体。通过SDS-PAGE、Western-blot和间接免疫荧光试验（IFA）对其进行检测，结果表明该抗体能够特异性识别ASFV感染细胞中表达的内源pH124R蛋白，且该蛋白主要定位于细胞质病毒工厂区域。本研究成功实现了ASFV pH124R蛋白的原核表达，并制备了可用于Western-blot和IFA试验的特异性多克隆抗体，为深入研究pH124R蛋白的生物学功能提供了重要生物学材料。
关键词：非洲猪瘟病毒;;pH124R蛋白;;原核表达;;多克隆抗体
基金资助：甘肃省重大人才项目(212068657016);; 甘肃省陇原青年英才(20230102);; 甘肃省科技重大专项(21ZD3NA001-5,22ZD6NA001);; 国家“十四五”重点研发计划项目(2021YFD1800100);; 黑龙江省“双一流”学科协同创新成果项目(LJGXCG2024-F07);; 甘肃省青年科技基金项目(25JRRA445)
