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作者：王梦旖;任静静;武正前;王志艺;吴俊煌;甘露露;李丹;尚佑军;郑海学;
单位：中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室;古浪县农业产业化服务中心;
摘要：制备非洲猪瘟病毒（ASFV）pH108R蛋白的多克隆抗体。首先，通过分析H108R基因的跨膜区（TR）并去除该区域，构建pH108R重组蛋白的原核表达质粒pET-22b-H108RΔTR，并经酶切鉴定验证成功构建此质粒。随后，将质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中，通过IPTG诱导表达pH108R蛋白。SDS-PAGE检测显示蛋白以包涵体形式表达，经镍柱亲和层析法纯化后，用于免疫豚鼠制备多克隆抗体。免疫印迹、间接免疫荧光和免疫共沉淀试验结果表明，制备的多克隆抗体能够特异地识别ASFV感染的猪肺泡巨噬细胞中表达的pH108R蛋白。本研究为深入研究ASFV pH108R蛋白的生物学功能提供了有效的检测工具。
关键词：非洲猪瘟病毒;;原核表达;;pH108R蛋白;;多克隆抗体
基金资助：“十四五”国家重点研发计划项目(2021YFD1800100);; 甘肃省重大专项(21ZD3NA001-5,22ZD6NA001);; 甘肃省重大人才项目(212068657016);; 甘肃省陇原青年英才项目(20230102)
