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作者：朱日宁;鞠安琪;王成宇;张芳毓;王永志;
单位：吉林省农业科学院(中国农业科技东北创新中心);
摘要：为了建立一种赤羽病病毒（AKAV）血清抗体间接ELISA检测方法，构建AKAV核衣壳（N）蛋白原核表达载体，以原核表达的重组AKAV N蛋白为包被抗原，建立了间接ELISA检测方法。结果表明：N蛋白主要以包涵体形式表达，大小为26 k Da。建立的间接ELISA方法及优化后的最佳检测条件为：抗原包被质量浓度1.00 mg/L，包被条件为37℃孵育1 h；血清稀释比例为1∶400,37℃孵育45 min;HRP酶标二抗37℃孵育45 min；底物反应条件为37℃避光5 min；阳性判定临界值为P/N=1.687。该间接ELISA检测方法具有较好的特异性，与常见的反刍动物病原阳性血清不发生交叉反应，敏感性达到1∶2 560，批内变异系数小于5.00%，批间变异系数小于10.00%。建立的AKAV血清抗体间接ELISA方法可以应用于赤羽病临床大量样本检测，为AKAV的早期检测奠定了理论基础。
关键词：赤羽病;;核衣壳(N)蛋白;;原核表达;;间接ELISA;;血清抗体
基金资助：吉林省农业科技创新工程项目(CXGC2022RCB005);; 吉林省科技发展计划吉林省肉牛产业化发展重大科技专项(YDZJ202203CGZH050)
