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作者：常志海;毛箬青;栗亮亮;郭金杰;陈桂珍;代宏宇;董海聚;朱紫祥;刘芳;郑海学;
单位：河南农业大学动物医学院;中国农业科学院兰州兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室农业农村部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室;
摘要：为研究CD82蛋白在猪病中的功能，提供一种针对猪CD82蛋白的单克隆流式抗体，本研究通过原核表达系统制备猪CD82蛋白大细胞外环结构域（EC2）重组抗原，经Ni-NTA亲和层析柱纯化后，免疫BALB/c小鼠。通过4次免疫和ELISA筛选，获得抗体效价最高的小鼠，用其脾细胞进行细胞融合。对融合细胞上清用流式细胞术进行筛选，选取效果最好的1株杂交瘤细胞株11G3制备腹水并纯化，其抗体亚型为IgG2a型。通过间接ELISA和流式细胞术对纯化后的CD82 mAb进行验证，显示出高亲和力和特异性，能有效标记表达CD82蛋白的猪肺巨噬细胞（PAM）。本研究结果为CD82蛋白在猪病中的功能研究提供了重要的生物学工具，为进一步探索其在免疫调节和抗病毒反应中的作用奠定了基础。
关键词：CD82蛋白;;单克隆抗体;;原核表达;;流式细胞术
基金资助：国家自然科学基金项目(32302894);; 十四五国家重点研发计划项目(2023YFD1801300)
