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作者：王佳佳;贾艳艳;陈松彪;廖成水;郭荣显;余祖华;丁轲;
单位：河南科技大学功能微生物与畜禽健康实验室;洛阳市活载体生物材料与动物疫病防控重点实验室;河南科技学院动物科技学院;
摘要：为探究羊源溶血性曼氏杆菌（Mannheimiahaemolytica,Mh）分离株MH-1对RAW264.7细胞炎症因子表达的影响及可能的机制，本研究以不同剂量的MH-1菌株感染RAW264.7细胞，经CCK-8法确定合适的感染复数（MOI），采用RT-qPCR检测细胞中NLRP3、Caspase-1、IL-1β、TNF-α和IL-6的mRNA转录水平，采用间接ELISA检测细胞上清中IL-1β、TNF-α和IL-6的分泌水平，通过Western-blot检测细胞中NLRP3和Caspase-1的蛋白表达水平。结果显示，以MOI=20的MH-1菌株感染RAW264.7细胞时，细胞无明显损伤，故以此剂量进行后续试验。RT-qPCR结果显示，与对照组相比，在MH-1菌株感染的RAW264.7细胞中，IL-1β、TNF-α、IL-6及NLRP3的mRNA转录水平极显著升高（P<0.01）,Caspase-1的mRNA转录水平显著升高（P<0.05）。间接ELISA结果显示，与对照组相比，MH-1菌株感染的RAW264.7细胞上清中，IL-1β、TNF-α和IL-6蛋白分泌水平极显著升高（P<0.01）。Western-blot结果显示，与对照组相比，MH-1菌株感染的RAW264.7细胞中NLRP3和Caspase-1的蛋白表达水平极显著升高（P<0.01）。加入MCC950抑制NLRP3炎性小体的激活后，Caspase-1的活化也被抑制，与此同时，炎症因子IL-1β、TNF-α和IL-6的转录和分泌也被显著抑制。本研究结果表明，MH-1菌株感染可诱导RAW264.7细胞发生炎症反应，且NLRP3炎性小体在此炎症反应中发挥重要作用，为Mh发病机制研究及其所致疾病的防治提供了参考依据。
关键词：羊源溶血性曼氏杆菌;;RAW264.7细胞;;炎症因子;;NLRP3炎性小体
