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作者：吕世盟;尚蕊蕊;钟霞;路亦桐;张光恒;高豪男;崔雅茹;张浩;阎兆君;魏盛;
单位：山东中医药大学第一临床医学院;山东中医药大学康复医学院;北京大学公共卫生学院儿童青少年卫生研究所;山东中医药大学中医药创新研究院;山东中医药大学实验中心;山东中医药大学附属医院;中医药经典理论教育部重点实验室/山东省中医药基础理论创新与应用研究重点实验室/中医药防治重大脑疾病山东省工程研究中心/济南市中医药重大脑疾病防治重点实验室,山东中医药大学;山东中医药大学中医药与脑科学交叉学科研究中心;
摘要：目的 通过网络药理学及分子对接技术探讨养神定志颗粒抗抑郁作用机制，并进行实验验证。方法 通过TCMSP及BATMAN-TCM数据库收集养神定志颗粒潜在活性成分与靶点，在DrugBank、GeneCards及OMIM数据库收集抑郁症潜在靶点，并与养神定志颗粒潜在靶点取交集作为潜在关键靶点，将关键靶点导入String数据库获得蛋白质相互作用(PPI)网络；并将潜在活性成分与潜在关键靶点导入Cytoscape软件获得网络图，筛选出养神定志颗粒潜在关键活性成分；利用Metascape数据库对潜在关键靶点进行GO和KEGG功能富集分析；最后通过AutoDock软件进行分子对接，并将对接结果可视化。构建慢性不可预知性温和应激(CUMS)大鼠抑郁症模型，给予养神定志颗粒(2、4、8 g/kg)进行干预，采用糖水偏好实验、旷场实验、强迫游泳实验观察大鼠行为学；HE染色和尼氏染色法观察大鼠海马脑区结构；免疫荧光染色法观察大鼠海马脑区小胶质细胞和NLRP3荧光度；Western blot法检测大鼠海马TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路相关蛋白表达。结果 共筛选得到养神定志颗粒560个作用靶点与42种潜在活性成分，抑郁症1 014个非重复靶点，两者取交集后共得到163个潜在关键靶点；KEGG富集分析涉及NOD样受体(NLR)及Toll样受体(TLR)信号通路等。分子对接结果显示，养神定志颗粒中潜在活性成分与部分关键靶点(TLR4、NF-κB、NLRP3)结合良好。行为学结果显示，养神定志颗粒能改善CUMS诱导的抑郁样行为，并且缓解大鼠海马病理损伤；免疫荧光及Western blot结果显示，养神定志颗粒能抑制小胶质细胞激活及抑制TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路活性。结论 养神定志颗粒通过多成分、多靶点及多途径发挥抗抑郁作用，其中可能与抑制TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路密切相关。
关键词：养神定志颗粒;;抑郁症;;网络药理学;;分子对接;;TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路
基金资助：泰山学者工程专项经费资助(tsqn202211137);; 国家中医药管理局高水平中医药重点学科中医基础理论学科(zyyzdxk-2023118);; 全国中医药高等教育学会工作研究会课题(XGNH2023-K03);; 山东中医药大学中医药与脑科学青年科研创新团队(22202101);山东中医药大学科学研究基金重点项目(KYZK2024Z08)
