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作者：吴帅斌;龙宥茨;鲜思美;孙创奇;蒋尊;安红艳;杨琴;
单位：贵州大学动物科学学院;贵州省动物疫病研究所;
摘要：为了研究羔羊睾丸（Lamb Testicular,LT）细胞eIF3i蛋白的生物学功能，试验通过克隆测序获得eIF3i基因并构建系统进化树，采用生物信息学软件分析其生物学特征并将其编码基因的PCR扩增产物亚克隆至pDsRED-Monomer-N1真核表达载体，构建重组质粒pDsRED-Monomer-N1-eIF3i，经酶切、测序鉴定正确后，转染至HEK-293T细胞，Western Blotting分析eIF3i蛋白的表达情况，激光共聚焦显微镜观察eIF3i蛋白在HEK-293T细胞内的定位。结果显示，羔羊LT细胞eIF3i基因大小为978 bp，编码345个氨基酸，其序列与绵羊的亲缘关系最近（相似性高达99.2%），与家鼠亲缘关系最远（相似性为55.0%）。eIF3i是一种无信号肽和跨膜结构、稳定亲水性非分泌蛋白；eIF3i的二级结构主要由延伸链、无规则卷曲构成，与三级结构预测结果一致；eIF3i无核定位和核输出信号；此外，试验成功构建出重组质粒pDsRED-Monomer-N1-eIF3i,eIF3i蛋白在HEK-293T细胞中成功表达，其大小约为36 KDa,eIF3i定位于HEK-293T细胞的细胞质中。本研究成功地对eIF3i蛋白进行生物信息学分析、真核表达及亚细胞定位，为后续eIF3i蛋白细胞内功能研究奠定基础。
关键词：eIF3i;;羔羊睾丸细胞;;真核表达;;亚细胞定位;;生物信息学分析
基金资助：贵州省科学技术基金(黔科合基础-ZK[2023])一般106号;; 贵州省科技成果转化(黔科合成果[2024])一般104号;; 省级大学生创新创业训练计划项目(贵大省创字2023(024)号)
